Question

【題目】已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。人淋巴細胞中 有這兩種 DNA 的合成途徑，但一般不能無限增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有 S 途徑，但能不斷分裂增 殖。將這兩種細胞在培養皿中混合，加促融劑促進細胞融合，獲得雜種細胞，并生產單克隆抗體。請 回答：

（1）生產單克隆抗體時，一般不直接利用一個B淋巴細胞，主要原因是____。

（2）①過程中，常用的與植物細胞融合不同的誘導方法是____ 。

（3）②過程為_培養；為了從培養液中分離出雜種細胞，需在②過程向培養液中加入__________， 理由是雜交瘤細胞可利用____途徑合成 DNA，從而才能在該培養液中增殖。

（4）③過程的目的是選育出____ 細胞，需要進行克隆化培養和抗體檢測，克隆化的方法最常用的 是有限稀釋法，即稀釋細胞到 7～10 個細胞／ml，每孔滴入____ （選填“0.1”或“1”或“10”） ml 細胞稀釋液。

（5）④表示雜交瘤細胞的擴大培養，其既可在體外培養，也可注射到小鼠____ 內培養。體內培養與體外培養相比，其優點是____ 。

Answer 1

【答案】B 淋巴細胞不能無限增殖 滅活的病毒 動物細胞 氨基蝶呤 淋巴細胞中的 S 能產生特定抗體的雜交瘤細胞 0.1 腹腔 無需再提供營養物質以及無菌環境，操作簡便

【解析】

圖中顯示了單克隆抗體制備的過程，通過動物細胞融合、動物細胞培養以及根據題干信息設定特定培養基篩選出所需特異性抗體的雜交瘤細胞。單克隆抗體的制備中有兩次篩選：第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。

（1）淋巴細胞一般不能無限增殖，因此生產單克隆抗體時，一般不直接利用一個B淋巴細胞。

（2）動物細胞融合和植物細胞融合相同的誘導方法是物理法和化學法，動物細胞特有的誘導方法是用滅活的病毒。

（3）動物細胞融合后要進行動物細胞培養，且要進行篩選，從融合細胞中選出雜交瘤細胞，因為細胞合成 DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷，而人淋巴細胞中有這兩種 DNA 的合成途徑，但一般不能無限增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，因此在培養液中加入氨基蝶呤進行選擇，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，只有雜交瘤細胞可利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA，在該培養液中增殖。

（4）③過程的篩選目的是選出能能產生特定抗體的雜交瘤細胞，克隆化培養常用有限稀釋法，即稀釋細胞到 7～10 個細胞／ml，為了達到單克隆培養的目的，則每個孔中不多于一個細胞，因此每孔滴入0.1 ml 細胞稀釋液。

（5）培養雜交瘤細胞可以體外培養，也可以在小鼠的腹腔內培養，單克隆抗體的提取可以在體外培養液中或體內的腹水中提取，體內培養比體外培養具有無需提供營養物質以及無菌環境，操作簡便的優點。