Question

【題目】口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種動物傳染病,目前常用接種弱毒疫苗的方法預防。疫苗的主要成分是該病毒的一種結構蛋白VP1�？茖W家嘗試利用轉基因番茄來生產口蹄疫疫苗。請回答下列問題:

（1）口蹄疫病毒的遺傳物質為RNA,則獲得可重組到質粒的VP1基因必須用到__________酶。要獲得大量該VP1基因,可利用__________技術進行擴增。

（2）如圖是VP1基因、農桿菌Ti質粒結構示意圖,若用以構建具有VP1基因的基因表達載體,還需要在質粒中插入__________。

（3）VP1基因應插入到農桿菌Ti質粒的__________上,通過__________作用進入番茄細胞并插入到染色體DNA,使VP1基因能夠穩定存在并發揮作用。

（4）通常用BamHⅠ、HindⅢ兩種限制酶切割VP1基因和H質粒的目的是__________;要篩選出含有該目的基因表達載體的農桿菌,首先需要在含__________的培養基上進行。

（5）檢測發現染色體DNA上插入VP1基因的某些番茄細胞死亡了,導致這些轉基因番茄細胞死亡的最可能原因是__________。

（6）將成功轉入VP1基因的受體細胞進行培養,獲得轉基因植株。若要快速繁殖大量這種轉基因種苗,應選取幼枝的__________部位進行組織培養。

（7）獲得表達VP1蛋白的番茄植株以后,要進行免疫效力的測定,具體方法是:將從轉基因番茄葉片中提取的VP1蛋白質注射到一定數量的豚鼠體內,每半個月注射一次,三次注射后檢測豚鼠血液中產生的__________數量,為了使結果可信,應設置空白對照組,注射__________。

Answer 1

【答案】 逆轉錄 PCR 啟動子 T-DNA 轉化 防止VP1基因、Ti質粒的自身環化 卡那霉素 VP1基因的插入可能破壞了生命活動必需的某些基因，導致細胞死亡 形成層(芽尖） VP1蛋白的抗體 等量生理鹽水

【解析】本題以科研成果為背景考查基因工程和細胞工程以及特異性免疫的相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，能運用所學知識，通過比較、分析等方法對某些生物學問題進行解釋，做出合理的判斷．

（1）口蹄疫病毒的遺傳物質為RNA，以RNA為模板在逆轉錄酶作用下經逆轉錄可獲得VPI基因；PCR技術可在體外大量擴增目的基因；

（2）構建具有VP1基因的基因表達載體還需要在質粒中插入啟動子，啟動子是RNA聚合酶的結合位點，能啟動轉錄過程．

（3）VP1基因應插入到農桿菌Ti質粒的T-DNA上，通過轉化作用進入番茄細胞并插入到染色體DNA上，使VP1基因能夠穩定存在并發揮作用。

（4）用限制酶BamHⅠ、HindⅢ切割出的末端完全不同，這樣可以防止目的基因、運載體自身環化，也能防止目的基因和運載體反向連接，即可以保證目的基因和質粒的定向連接。由于普通農桿菌中不含標記基因，只有導入重組質粒的農桿菌中含卡那霉素抗性基因，所以在培養基中添加卡那霉素可篩選出含有該目的基因表達載體的農桿菌。

（5）檢測發現染色體DNA上插入VP1基因的某些番茄細胞死亡了，導致這些轉基因番茄細胞死亡的最可能原因是VP1基因的插入可能破壞了生命活動必需的某些基因，導致細胞死亡。

（6）若要快速繁殖這種轉基因種苗，可用植物組織培養技術，應選取細胞分裂旺盛的幼枝的形成層（芽尖）部位作為組織培養材料。

（7）VP1蛋白質作為抗原注射到小鼠體內，可引起小鼠產生特異性免疫反應，產生相應的抗體，其結果可通過檢測豚鼠血液中產生的VP1蛋白的抗體數量來確定；為了使結果可信，應設置注射生理鹽水的空白對照組。

[點睛]：本題解題關鍵是：1.識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟；理清農桿菌轉化法的過程及原理；2. 識記植物組織培養的原理及選材；3.正確分析題圖，理解基因表達載體的構建過程，聯系教材相關知識，再結合所學的知識準確答題．