Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫用價值。科研人員通過生物工程技術獲得轉HSA基因母牛，以便通過乳腺生物反應器生產HSA，其主要技術流程如下圖所示。

回答下列問題：

(1)為了通過乳腺生物反應器生產出HSA，在構建基因表達載體時，HAS基因的首端應連接____。

(2)如上圖所示，將牛胎兒成纖維細胞核移入去核卵母細胞中，該技術稱為___________技術：供核的牛胎兒成纖維細胞通常選用傳代10代以內的細胞，其原因是____________________。

(3)胚胎移植時，為使代孕母牛能處于適合的生理狀態，需要用激素對其進行_________處理。

(4)SRY—PCR法性別鑒定的基本程序是：提取牛胎兒成纖維細胞的DNA，經PCR反應體系擴增SRY基因(Y染色體上特有的性別決定基因)片段，然后對擴增產物進行檢測。

①PCR反應體系中除含緩沖液、模板DNA、四種脫氧核苷酸、引物以外，還應含有_____，引物應選用下圖中的_______(填圖中標號)。

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ是引物，箭頭是延伸方向。

②若擴增產物含大量SRY基因片段，則該種牛胎兒成纖維細胞_________(填“能”或“不能”)用作技術流程中轉化過程的受體細胞。

(5)從細胞水平鑒定早期胚胎性別的方法是分析細胞的___________組成。

Answer 1

【答案】乳腺蛋白基因的啟動子 細胞核移植（體細胞核移植） 能保持正常的二倍體核型（能保持遺傳物質不變） 同期發情 熱穩定DNA聚合酶（Taq酶） Ⅰ和Ⅳ 不能 染色體

【解析】

構建基因表達載體時，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子，基因表達載體的組成包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。據圖分析，圖示涉及到的技術有基因工程和核移植技術，先將HAS基因與質粒結合形成重組質粒，再將重組質粒導入牛胎兒成纖維細胞；接著將導入目的基因的成纖維細胞的細胞核取出，與去核卵母細胞重組形成重組細胞，培養成早期胚胎后移植到代孕母牛體內，最終獲得了轉基因母牛。

（1）為了通過乳腺生物反應器生產出HSA，在構建基因表達載體時，HAS基因的首端應連接乳腺蛋白基因的啟動子。

（2）將牛胎兒成纖維細胞核移入去核卵母細胞中，該技術稱為細胞核移植（體細胞核移植）技術；由于10代以內的細胞能保持正常的二倍體核型（能保持遺傳物質不變），因此供核的牛胎兒成纖維細胞通常選用傳代10代以內的細胞。

（3）胚胎移植時，為了為使代孕母牛和供體母牛處于相同的生理狀態，需要用激素對其進行同期發情處理。

（4）①PCR反應的條件：模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物、熱穩定DNA聚合酶。引物是一小段單鏈DNA，引物5′端的堿基可以與DNA兩條鏈的3′端的堿基進行堿基互補配對，可作為DNA復制的起始點，DNA聚合酶從引物的3′端的開始延伸DNA鏈，因此要擴增SRY基因，應選用圖中的Ⅰ和Ⅳ作為引物。

②只有母牛能產生乳汁，能作為生物反應器，因此若擴增產物含大量SPY基因片段，由于SRY基因是Y染色體上特有的性別決定基因片段，則該種牛胎兒為雄性，其成纖維細胞不能用作技術流程中轉化過程的受體細胞。

（5）從細胞水平鑒定早期胚胎性別的方法是分析細胞的染色體組成。