Question

【題目】如圖是綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖同答：
（1）分析可知，科學(xué)家獲取綠色熒光蛋白基因所運用的限制酶是圖中所示的 ， 最終獲得的綠色熒光蛋白基因的末端類型屬于 ．
（2）圖示工程中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞的過程③稱為 ， 常用的方法是 ．
（3）圖示中，作為受體細胞的去核卵母細胞一般處在期，常通過（物理方法）進行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進程．
（4）培養(yǎng)圖示重組細胞時，將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按其種類、數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)基．通常在培養(yǎng)基中還需要加入適量的等天然成分．
（5）圖示重組細胞培養(yǎng)至一定階段可通過方法，從而一次獲得多個轉(zhuǎn)基因豬．過程⑧的實質(zhì)是 ．

Answer 1

【答案】
（1）PstⅠ和EcoRⅠ；黏性末端
（2）轉(zhuǎn)化；顯微注射法
（3）MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）；電脈沖（或電刺激）
（4）合成；血清（或血漿）
（5）胚胎分割、胚胎移植；早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移
【解析】解：（1）圖中所示的限制酶PstI和EcoRⅠ可以切割DNA片段，獲取綠色熒光蛋白基因，并不能破壞目的基因．限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端不平整，即末端為黏性末端．（2）轉(zhuǎn)化是指將目的基因進人受體細胞內(nèi)，并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程．如圖示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞的過程．因受體細胞為動物細胞，常用的方法是顯微注射法．（3）受體細胞常選用去核卵（母）細胞的原因：卵（母）細胞大，容易操作；卵（母）細胞質(zhì)多，營養(yǎng)豐富；含有促使細胞全能性表達的物質(zhì)．一般取處在MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）期的去核卵母細胞作為受體細胞的，通過電脈沖（或電刺激）進行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進程．（4）培養(yǎng)圖示重組細胞時，將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按其種類、數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基．動物細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．通常在培養(yǎng)基中還需要加入適量的血清（或血漿）等天然成分．（5）胚胎分割采用機械方法將早期胚胎切割，經(jīng)移植獲得同卵雙胚或多胚，從而獲得較多基因型相同的轉(zhuǎn)基因豬．圖示重組細胞培養(yǎng)至桑椹胚或囊胚，可通過胚胎分割、胚胎移植方法，從而一次獲得多個轉(zhuǎn)基因豬．過程⑧是胚胎移植過程，其實質(zhì)是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移． 所以答案是：（1）PstⅠ和EcoRⅠ黏性末端；（2）轉(zhuǎn)化；顯微注射法；（3）MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）；電脈沖（或電刺激）；（4）合成；血清（或血漿）；（5）胚胎分割、胚胎移植；早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移
【考點精析】解答此題的關(guān)鍵在于理解基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)，以及對動物細胞與組織培養(yǎng)過程的理解，了解取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．