Question

【題目】請回答基因工程方面的有關問題：

（1）利用PCR技術擴增目的基因，其原理與細胞內DNA復制類似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。

①從理論上推測，第四輪循環產物中含有引物A的DNA片段所占比例為_________。

②在第_______輪循環產物中開始出現兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段，第四輪出現了_______個等長的DNA片段。

（2）設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物（只標注了部分堿基序列）都不合理（如上圖），請分別說明理由。

第一組：____________________________________________________；

第二組：__________________________。

（3）用限制酶EcoRV、MboI單獨或聯合切割同一種質粒，得到DNA片段長度如下圖（1kb即1000個堿基對），請在答題卡的指定位置畫出質粒上EcoRV、MboI的切割位點，并標注片段的長度。____________

Answer 1

【答案】 15/16 三 8 引物I和引物II局部發生堿基互補配對而失效 引物I′自身折疊后會出現局部堿基互補配對而失效

【解析】試題分析：采用PCR技術擴增DNA的過程為：變性、退火、延伸。根據PCR過程的特點繪制PCR過程示意圖，如圖所示：

（1）①由圖可知，由原來的每條母鏈為模板合成的兩個新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時，兩種引物都含有，故第四輪循環共產生16個DNA分子，其中含有引物A的分子是15個，占15/16。

②由圖示可知，第一、二輪循環合成的子鏈長度均不同，根據半保留復制特點可知，前兩輪循環產生的四個DNA分子的兩條鏈均不等長，第三輪循環產生的DNA分子出現兩個兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段，則四輪出現了8個等長的DNA片段。

（2）第1組：分析圖中引物可知，引物Ⅰ和引物Ⅱ的堿基之間存在互補配對關系，這可能會導致引物Ⅰ和引物Ⅱ會發生局部堿基互補配對而失效；第2組：圖中引物Ⅰ的兩側堿基具有堿基配對關系，因此引物Ⅰ自身折疊后會出現局部堿基互補配對而失效。

（3）根據圖示，該質粒為環形質粒，用限制酶EcoRⅤ單獨切割該質粒時，只形成一個片段，說明該質粒上只有1個限制酶EcoRⅤ的識別位點；用限制酶MboⅠ單獨切割該質粒時，形成兩個片段，說明該質粒上有兩個限制酶MboⅠ的識別位點．用限制酶EcoRⅤ和MboⅠ聯合切割該質粒時，形成三個片段，其中有一個片段的長度與用MboⅠ單獨切割該質粒時產生的片段長度相同（2.5kb），另外的兩個片段是5.5kb和6kb，這說明限制酶EcoRⅤ的切割位點存在于用MboⅠ單獨切割該質粒時產生的另一片段（11.5kb）上，質粒上EcoRV、MboI的切割位點如圖所示：