Question

【題目】某研究小組利用“濾膜法”對受污染的河流水體進行了大腸桿菌活菌數目的測定。回答下列問題：

(1)研究人員向葡萄糖蛋白胨培養液中加入適量的溴麝香草酚藍水溶液后，裝人圖甲所示的試管中，再將污水樣滴加進去振蕩搖勻，一段時間后，若觀察到溶液顏色變化情況為_________，，說明微生物在培養過程中產生了CO2。若要用重鉻酸鉀檢測微生物在培養過程中是否產生了酒精，具體做法是_________。

(2)利用圖乙所示的“濾膜法”測定大腸桿菌的數目時，應先制備牛肉膏蛋白胨固體培養基，該培養基的滅菌方法是_________，滅菌后待培養基冷卻至_________℃左右時，在_________附近倒平板。

(3)圖乙中濾膜的孔徑應_________(填“大于”“小于”或“等于”)大腸桿菌。若將濾膜轉移到伊紅美藍培養基上培養一段時間，然后統計_________色的菌落數目，就可估算出單位體積樣品中大腸桿菌的數目，但這樣得到的統計值往往要比實際值低，原因是_________。

Answer 1

【答案】由藍變綠再變黃 取2mL培養液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規察溶液顔色的變化 高壓蒸汽滅菌 50 酒精燈火焰 小于 黑 兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落

【解析】

二氧化碳可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃，酒精可以使得重鉻酸鉀溶液由橙色變為灰綠色；伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍培養基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅-美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑；常用的純化微生物時的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（1）微生物細胞呼吸產生的CO2可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃；微生物無氧呼吸產生的酒精可以用重鉻酸鉀進行檢測，即取2mL培養液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規察溶液顔色的變化。

（2）微生物培養基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌；待培養基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近進行倒平板。

（3）分析圖解可知，實驗將待測水樣進行過濾，得到的濾膜進行微生物培養，因此水中的大腸桿菌應留在濾膜上，即圖乙中濾膜的孔徑應小于大腸桿菌；在伊紅美藍培養基上，可以鑒定出菌落為黑色的具有金屬光澤的大腸桿菌菌落，因此該小組通過統計黑色菌落的數目，計算出單位體積樣品中大腸桿菌數目。由于培養基中兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落，因此理論上他們的統計值比實際值偏低。