Question

【題目】下圖是通過基因工程方法將人表皮細胞生長因子基因（EGF）和TCS基因連接起來，利用小鼠生產人表皮生長因子——天花粉蛋白融合蛋白的過程示意圖。請回答：

（1）為了建立含有EGF的cDNA文庫，應從健康人體的______細胞中提取總mRNA合成cDNA。從cDNA文庫中提取的EGF的長度比從基因組文庫中提取的EGF______。

（2）在①過程中，應使用的限制酶是_________，在融合蛋白基因的首端還應插入_____。

（3）將重組質粒導入大腸桿菌前，需先用_________處理大腸桿菌。為了篩選含重組質粒的大腸桿菌，首先置于含有_________的培養基進行培養，獲得大量重組質粒后，將其再移到小鼠體內。

（4）乙圖表示培育具有人表皮細胞生長因子基因（EGF）和TCS基因融合基因的小鼠的基本過程示意圖。①過程涉及細胞間的_________和融合過程，將重組質粒轉入到受精卵中采用_________方法，經過②_________和③過程，可獲得轉基因小鼠。小鼠出生后可以從其尾巴細胞中提取_________分子進行分析，通過_________方法，檢測小鼠細胞是否含有人融合基因。

Answer 1

【答案】表皮細胞 短 BamHI 、 sphI 啟動子 Ca+ （氯化鈣） 氨芐青霉素 識別 顯微注射 早期胚胎培養(動物細胞培養) DNA DNA分子雜交

【解析】

分析甲圖：圖示是將人表皮生長因子基因（EGF）和TCS基因連接起來，利用大腸桿菌生產人表皮生長因子--天花粉蛋白融合蛋白的過程示意圖，圖中①表示基因表達載體的構建過程。

圖乙中，①表示雌、雄小鼠進行雜交獲得受精卵的過程，②表示胚胎培養的過程，③表示胚胎移植的過程。

（1）EGF基因只在表皮細胞中表達，即只有表皮細胞中含有相應的mRNA，因此要獲得EGF基因，應從健康人體的表皮細胞中提取其mRNA，通過逆轉錄法合成．通過逆轉錄法合成的EGF基因不含內含子、啟動子等結構，因此其長度比從基因組文庫中獲取的EGF基因短。

（2）EGF基因兩側的限制酶是BamHI和SphI，因此在①過程中，應使用的限制酶是BamHI和SphI，而且在融合蛋白基因的首端還應插入啟動子。

（3）將重組質粒導入大腸桿菌前，首先用Ca2+處理大腸桿菌，使其轉變為感受態細胞。為了篩選含重組質粒的大腸桿菌，首先置于含有氨芐青霉素的培養基進行培養，獲得大量重組質粒后，將其再移到小鼠體內。

（4）①過程涉及到細胞間識別與融合，將重組質粒通過顯微注射的方法注入受精卵后，應進行②早期胚胎培養及③胚胎移植，可獲得轉基因小鼠。欲檢測目的基因的存在，應提取轉基因小鼠尾巴細胞中DNA分子予以分析。通過DNA分子雜交方法，檢測小鼠細胞是否含有人融。