Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜葉片細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．

（1）從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，然后利用_____技術(shù)分別進(jìn)行擴(kuò)增．

（2）如圖1，選用圖中的限制酶_____處理兩個(gè)基因后再用_____酶處理，得到_____（填圖中字母）端相連的融合基因．

（3）將上述融合基因插入圖2所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建_____并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含_____的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．

（4）剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是_____，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜．

（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術(shù)確定融合基因是否完成了_____（轉(zhuǎn)錄、翻譯）．

Answer 1

【答案】 PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)/多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） ClaⅠ DNA連接 A、D 基因表達(dá)載體 四環(huán)素 將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄

【解析】試題解析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對(duì)基因工程的知識(shí)的識(shí)記和理解能力。解答本題需熟記并理解基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問(wèn)題情境，從題圖和題意中提取有效信息進(jìn)行相關(guān)問(wèn)題的解答。

(1) 依題意可知：酶D基因與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因都屬于目的基因，擴(kuò)增目的基因，可利用PCR(或聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)。

(2) 酶D基因的A端與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的D端均含有ClaI的識(shí)別位點(diǎn)，因此可選用ClaⅠ限制酶處理兩個(gè)基因后獲得相同的粘性末端，再用DNA連接酶處理，得到A、D端相連的融合基因。

(3) 將上述融合基因插入上圖所示Ti質(zhì)粒的T—DNA中，構(gòu)建基因表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。因用于構(gòu)建基因表達(dá)載體的Ti質(zhì)粒上有四環(huán)素抗性基因，所以成功導(dǎo)入基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，為將其篩選出來(lái)，可將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落。

(4) 剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞并插入到其染色體DNA上，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜。

(5) 確定融合基因是否完成了轉(zhuǎn)錄過(guò)程，可采用DNA—RNA分子雜交技術(shù)。