Question

【題目】某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題：

（1）若利用PCR技術獲取抗鹽基因，需利用_____________尋找抗鹽基因的位置并進行擴增。

（2）將含有抗鹽基因的煙草細胞培養(yǎng)為煙草植株需借助_______________技術。

（3）在構建重組質(zhì)粒時，應選用_______________兩種酶對質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的惟一性。

（4）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標記的_______________作探針進行分子雜交檢測，又要用_______________方法從個體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

Answer 1

【答案】 引物 植物組織培養(yǎng) SalⅠ和 HindⅢ 抗鹽基因 一定濃度的鹽水澆灌（或“移栽到鹽堿地中”）

【解析】試題分析：根據(jù)題意和圖示分析可知：質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點。在質(zhì)粒上，這三種限制酶的切割位點都位于抗四環(huán)素基因上，用其任何一種酶都會破壞四環(huán)素抗性基因；在含抗鹽基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會破壞目的基因。

（1）若利用PCR技術獲取抗鹽基因，需利用引物尋找抗鹽基因的位置并進行擴增。

（2）將抗鹽基因導入煙草細胞后，利用植物組織培養(yǎng)技術獲得含有抗鹽基因的煙草植株。

（3）要SalⅠ酶切割含有目的基因的DNA與質(zhì)粒，形成相同的黏性末端，容易發(fā)生自身連接和反向接入；HindⅢ會破壞目的基因；則在構建重組質(zhì)粒時，應選用SalⅠ、HindⅢ兩種酶對質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（4）探針是指用放射性同位素標記的目的基因（抗鹽基因）；除了從分子水平上進行檢測，還可以從個體水平上進行鑒定，即用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株來鑒定煙草的耐鹽性。