Question

(10分）研究人員從血管內皮瘤中發現了一種新的血管增生抑制劑一內皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內皮抑素的方法，請分析回答下列問題：

(1) 從肝細胞中分離總RNA，經_________獲得cDNA，之后經過_________擴增內皮抑素基因。

(2) 擴增的目的基因與PUC18質粒（如圖14所示）都用EcoR I和BamH I進行雙酶切，然后用DNA連接酶進行連接，構建重組質粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接，還減少了________的連接，提高了重組質粒的比例。

(3) 大腸桿菌pUC18質粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因，lacZ基因便可表達出β-半乳糖苷酶，當培養基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被β-半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。反之，則形成白色菌落。

選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入_______物質。成功導入重組質粒的大腸桿菌在培養基中形成______________顏色的菌落，原因是_____________________。之所以選擇大腸桿菌作為基因工程的受體菌，其突出的優點是：___________________________________

(4) 從選擇培養基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養基中培養，獲得粗提表達產物。將等量毛細血管內皮細胞接種于細胞培養板，37⁰C培養。將等量不同濃度的粗提表達產物加進培養孔中，72h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并，______________實驗結果如下表所示。

結果說明__________________________________________

 

Answer 1

【答案】

 

【解析】略