Question

下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產乙肝疫苗的過程及有關資料，請分析回答下列問題。

【資料1】巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導而表達【5’AOX1和3’AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子】。

【資料2】巴斯德畢赤酵母菌體內無天然質粒，所以科學家改造出了圖1所示的pPIC9K質粒用作載體，其與目的基因形成的重組質粒經酶切后可以與酵母菌染色體發生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現表達。

（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質粒重組，應該在HBsAg基因兩側的A和B位置接上             、            限制酶識別序列， 這樣設計的優點是避免質粒和目的基因自身環化。

（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用                將其連接到pPIC9K質粒上，形成重組質粒，并將其導入大腸桿菌以獲取                。

（3）步驟3中應選用限制酶            來切割重組質粒獲得重組DNA，然后將其導入巴斯德畢赤酵母菌細胞。

（4）為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉化是否成功，在培養基中應該加入卡拉霉素以便篩選，轉化后的細胞中是否含有HBsAg基因，可以用                    方法進行檢測。

（5）轉化的酵母菌在培養基上培養一段時間后，需要向其中加入            以維持其生活，同時誘導HBsAg基因表達。

（6）與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優點是在蛋白質合成后，細胞可以對其進行                并分泌到細胞外，便于提取。

 

Answer 1

【答案】

（1）SnaB    AvrⅡ   （2）DNA連接酶     大量重組質粒  （3）BglⅡ

（4）DNA分子雜交    （5）甲醇          （6）加工（修飾）

【解析】（1）為了避免質粒和目的基因自身環化，應選擇雙酶切，目的基因應插入在啟動子和終止子之間，所以應在HBsAg基因兩側的A和B位置接上SnaB和AvrⅡ限制酶識別序列。

（2）連接兩個DNA片段的酶是DNA連接酶；將重組質粒導入大腸桿菌的目的是進行復制，以獲取大量的重組質粒。

（3）切割后形成的黏性末端包括5’AOX1和3’AOX1，則選擇的限制酶應是BglⅡ。

（4）檢測受體細胞中是否含有目的基因，其方法是DNA分子雜交法。

（5）巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源。

（6）細菌沒有內質網和高爾基體，而酵母菌是真核生物，有內質網和高爾基體，能夠對分泌蛋白進行加工修飾。