Question

（08江蘇卷）將動物致病菌的抗原基因導入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關的圖和表。

請根據以上圖表回答下列問題。

（1）在采用常規PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內的DNA聚合酶，其最主要的特點是                          。

（2）PCR過程中退火（復性）溫度必須根據引物的堿基數量和種類來設定。表1為根據模板設計的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？__________。

（3）圖1步驟③所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性？              。

（4）為將外源基因轉入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉基因所用的細菌B通常為               。

（5）對符合設計要求的重組質粒T進行酶切，。假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據圖1中標示的酶切位點和表2所列的識別序列，對以下酶切結果作出判斷。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________種DNA片斷。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________種DNA片斷。

Answer 1

答案：（1）耐高溫 

 （2）引物對B 

 （3）否 

 （4）農桿菌 

 （5）①2  ②1

解析：（1） PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特性。（2）引物B中含C與G的堿基對較多，可采用較高的退火溫度。（3）多種限制酶切割，形成不同的切割位點，所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列就沒有專一性要求。（4）植物基因工程中常用農桿菌做受體細胞。（5）據圖分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段產生了X、Y兩個片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割質粒產生了 M、N兩個片段，且M、N片段間存在Pst I酶切點。因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割這兩片段形成的重組質粒，由于保留了Pstl的切割位點，所以可以得到兩種DNA分子。而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質粒中，如圖I-②過程只能產生一種DNA片斷。

點評：本題考查運用PCR方法擴增目的基因的有關知識以及圖解的識別能力，尤其是限制酶的作用是解答本題的難點和關鍵點。