Question

【題目】科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如下圖：

（1）步驟①的技術名稱是 。

（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有 。

（3）步驟③中，需要構建含有干擾素基因的 。由于DNA復制時，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從下圖A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取作為引物。對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶的組合為 或 。

（4）將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發 色熒光的細胞進行體外誘導。為檢測干擾素基因是否表達，可以采用 的方法。

Answer 1

【答案】（1）核移植

（2）發育的全能性

（3）基因表達載體 B和C HindⅢ和PstⅠ EcoRⅠ和Pst Ⅰ

（4）綠 抗原一抗體雜交

【解析】（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．

（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有全能性．

（3）步驟③是將目的基因導入ES細胞，該過程之前需要構建基因表達載體；DNA復制只能從5’到3’，因此構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．

（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發綠色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用抗原-抗體雜交法