Question

【題目】已知圖1，圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，且限制酶的切點是唯一的，外源DNA插入會導致相應的基因失活．請回答有關基因工程操作的問題：
（1）圖1表示的是一個經過的作為載體的質粒，其化學本質是 ． 作為基因表達載體，除圖1所示結構外，還需具有 ．
（2）根據圖中所給信息，構建基因表達載體時，應選用的限制酶是 ． 若將基因表達載體導人大腸桿菌，一般先用鈣離子處理，使其成為細胞，以利于吸收周圍環境中的DNA分子；然后讓基因表達載體在中與該細胞混合，調控溫度完成轉化過程．
（3）為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，應在培養基中添加 ， 培養一段時間后，平板上長出的菌落，用PCR技術鑒定時，所用的引物是圖2中 ．

Answer 1

【答案】
（1）人工改造；環狀DNA分子；目的基因和終止子
（2）BclI和HindⅢ；感受態；緩沖液
（3）四環素；引物甲和引物丙
【解析】解：（1）圖1表示的是一個經過人工改造的作為載體的質粒，質粒的化學本質為小型環狀DNA；基因表達載體的組成包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因等．（2）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質粒中的啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．將目的基因導入微生物細胞常用感受態細胞法，即用Ca2+處理，使其處于感受態，以利于吸收周圍環境中的DNA分子；然后讓基因表達載體在緩沖液中與該細胞混合，調控溫度完成轉化過程．（3）了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據質粒上的抗性基因，應在篩選平板培養基中添加四環素．PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙． 所以答案是：（1）人工改造 環狀DNA分子 目的基因和終止子（2）BclI和HindⅢ 感受態 緩沖液（3）四環素 引物甲和引物丙
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術．