Question

【題目】下圖表示我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的具體培育過程。請據圖回答下列問題：

（1）圖中A過程是采用從___________中獲取綠色熒光蛋白基因，該文庫中含有該生物部分基因序列。如果對已有的綠色熒光蛋白基因進行大量擴增，需要用_________方法，該方法的原理是DNA復制，這項技術需要用到Taq酶，該酶需從________的末端開始催化子鏈的延伸。

（2）將綠色熒光蛋白基因導入成纖維細胞，B過程首先要構建_________，然后通過_______________________法導入成纖維細胞。

（3）從豬胚胎中獲取單個的成纖維細胞進行培養，需用C______酶處理豬胚胎的部分組織。

（4）E過程得到卵母細胞后，要做去核處理，最常用方法是_________________________。

（5）G過程需要用___________（化學）方法激活重組細胞，使之完成分裂和發育進程，并最終發育為早期胚胎。

（6）Ⅰ過程可以在分子水平上用___________________方法檢測綠色熒光蛋白基因是否成功表達。

Answer 1

【答案】cDNA文庫 PCR技術 引物 基因表達載體 顯微注射 胰蛋白酶或者膠原蛋白酶 顯微操作去核法 乙醇、蛋白酶合成抑制劑或者鈣離子載體 抗原-抗體雜交

【解析】

分析圖解可以看出，該熒光克隆豬涉及了多項生物工程技術：首先導入目的基因的豬的成纖維細胞，要經過動物細胞培養篩選出轉基因體細胞，然后該細胞與成年母豬的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞，重組細胞經過早期胚胎培養到桑葚胚或囊胚期，最后經過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內，最后生成熒光克隆豬。該過程中利用了基因工程、動物細胞培養、細胞核移植、早期胚胎培養和胚胎移植等技術。

（1）根據題意分析，A過程是從含有該生物部分基因序列的文庫中獲得目的基因的，因此該文庫為cDNA文庫；擴增目的基因常用PCR技術，需要特殊的耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）的催化，該酶需從引物的末端開始催化子鏈的延伸。

（2）圖中B過程是將綠色熒光蛋白基因導入成纖維細胞的過程，該過程首先要構建構建基因表達載體，然后通過顯微注射技術將該基因表達載體導入成纖維細胞（動物細胞）。

（3）圖中豬胚胎的部分組織需要用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理，才能獲得單個的成纖維細胞。

（4）E過程得到卵母細胞常用顯微操作去核法去掉其細胞核，以作為核移植的受體細胞。

（5）G過程為重組細胞培養成早期胚胎的過程，該過程需要用乙醇、蛋白酶合成抑制劑或者鈣離子載體方法激活重組細胞，使之完成分裂和發育進程，并最終發育為早期胚胎。

（6）Ⅰ過程綠色熒光蛋白基因表達產生的熒光蛋白可以用抗原-抗體雜交技術進行檢測。