Question

【題目】高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖1所示。請分析回答下列問題：

（1）按功能分，Ⅰ號培養基稱為______；該培養基中必須以______作為唯一碳源。對配制的培養基采用高壓蒸汽滅菌，目的是______。

（2）過程①②合稱為______法，若該過程所得平板上的平均菌落數為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數為105時，則每毫升樣品中的細菌數約為______個。

（3）在1號培養基上挑出能產生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養基上會出現以該菌的菌落為中心的______；也可將得到的菌懸液轉接于同時含有葡萄糖和淀粉作碳源的固體培養基上培養，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，看到如圖2所示情況，可判斷圖中______的菌落含有所需菌種。

（4）將高溫淀粉酶應用于生產，需要對其進行固定化處理，對酶活性影響最小的處理方法是______。

Answer 1

【答案】選擇培養基 淀粉 防止雜菌污染（或殺死培養基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或使培養基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力） 稀釋涂布平板 2.5×107 透明圈 周圍不顯藍色 物理吸附法

【解析】

接種微生物的方法主要是稀釋涂布平板法和平板劃線法；稀釋涂布線法：逐步稀釋菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養；平板劃線法由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落．高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個設備，一般壓力在100KPa，溫度在121℃的條件下，維持15～30分鐘用于培養基的滅菌；用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法；火焰灼燒可以迅速徹底地滅菌，適用于微生物的接種工具，如接種環、接種針等。

（1）由圖可知，Ⅰ號培養基的作用是篩選能高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，因此屬于選擇培養基，該培養基需要以淀粉為唯一碳源。滅菌的目的是使培養基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力（或殺死培養基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止雜菌污染）。

（2）Ⅰ號培養基上菌落分布均勻，說明過程①②采用的是稀釋涂布平板法。每毫升樣品中的細菌數約為50÷0.2×105=2.5×107個。

（3）根據題意可知，Ⅰ號培養基上會出現以該菌的菌落為中心的透明圈可以鑒別嗜熱菌菌落。淀粉與碘液反應呈藍色，但如果淀粉分解菌產生的淀粉酶將淀粉水解后就不能呈藍色，則會出現無色的透明圈，故圖乙所示情況中無藍色透明圈的菌落含有所需菌種。

（4）固定化酶通常用物理吸附法和化學結合法，其中對酶活性影響最小的處理方法是物理吸附法。