名校課堂系列答案科目：高中生物 來源： 題型：
目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。
（1）建構基因表達載體時，必須有 、復制原點、目的基因、終止子以及 。
（2）構建人工質粒時要有抗性基因，以便于 。
（3）pBR322分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoRl只能識別序列—GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRl的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端 。
（4）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現將經BamHI處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復 ，成功獲得了重組質粒。說明 。
（5）為了檢測上述重組質粒是否導入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落；再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是 。圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是 。
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科目：高中生物 來源：2013年上海市普陀區高三高考二模生物試卷 題型：綜合題
研究人員利用基因工程技術對肺癌的治療進行了大量研究，肺部細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖所示，據圖回答
1.在基因工程中通常選擇細菌質粒作為載體，原因是 ；如果某質粒由100 0個脫氧核苷酸組成，脫氧核苷酸平均分子量為a,則該質粒的質量為 。
2.圖甲中在構建重組載體時，酶切目的基因和酶切質粒時，所用的限制酶可以不同，但是產生的粘性末端必須是 。
3.圖甲中在將酶切后的目的基因導入到酶切后的質粒上時需要的酶是 ， 圖乙中let-7基因轉錄過程需要的酶是 ，這 兩種酶作用的化學鍵都是 。
4.EcoR I限制酶只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoR I的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。
5.原代培養是是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。原代培養隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，空間因素和營養因素會限制其進一步生長。此時就需要將培養物分割成小的部分（組織細胞分散開），重新接種到另外的培養器皿內再進行培養，這個過程就稱為傳代或者再培養。圖甲中進行傳代培養操作時，需要用 酶處理貼附在原代培養培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。
6.研究發現，let-7基因能影響RAS基因的表達，其影響機理如圖乙所示。從分子水平的角度分析，其作用機理是 。
7.下圖所示pBR322是目前常用的人工質粒載體。如果將BamHI處理后的pBR322質粒與用BgIⅡ處理得到的目的基因進行重組，并將重組質粒導入原本無ampR和tetR 的大腸桿菌進行培養。為了檢測重組質粒是否成功導入大腸桿菌，現將上述大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是___ _____ ，圖三結果顯示，多數大腸桿菌內導入的是___ __。
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科目：高中生物 來源：2013屆海南省高二下學期期中考試生物試卷（解析版） 題型：綜合題
目前所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖所示。
(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于 。
(2)pBR322分子中有單個EcoR I限制酶作用位點，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoR I的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。
(3)pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現將經BamHI處理后的質粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復___ ___ 鍵，成功的獲得了重組質粒。
(4)為了檢測上述重組質粒是否導入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是___ _____ ，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是___ __。
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科目：高中生物 來源：2011-2012學年山西省高三上學期9月份月考生物試卷 題型：綜合題
（11分）目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。
(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質粒，則C表示 。
(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質粒。能形成重組質粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是_______，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環素的抗性基因。
將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質粒X－1混合連接，連接后獲得的質粒類型有＿＿＿。（可多選）A．X－1 B．X－2 C．X－3 D．X－4
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科目：高中生物 來源：2010-2011學年山東省高三上學期第三次質量檢測生物試卷 題型：選擇題
大腸桿菌的某蛋白質分子有1條肽鏈組成，其相對分子質量為a，假如組成此蛋白質的氨基酸的相對分子質量為b，則控制該蛋白質合成的結構基因最可能有堿基多少個？（不考慮終止密碼）
A．3(a-18)/b B．6(a-18)/b C．3(a-18)/(b-18) D．6(a-18)/(b-18)
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