Question

(10分)肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)的基本流程如下圖甲所示。

請回答：

(1)進(jìn)行過程①時，需用　　　　酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為　      。

(2)進(jìn)行過程②時，需用　　　　酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。

(3)研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖乙所示。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取　　　　　　　進(jìn)行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是細(xì)胞中　　　　　　(選填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量減少引起的。

 

Answer 1

【答案】

 (1)限制性核酸內(nèi)切(或限制)　啟動子　　(2)胰蛋白   (3)RNA　RAS蛋白

【解析】

試題分析：(1)過程①表示基因工程操作步驟中基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶(簡稱限制酶)對載體進(jìn)行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，RNA聚合酶結(jié)合到該位點，可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程。

(2)過程②表示動物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后，可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細(xì)胞，隨后分裝到新的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

(3)判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來檢測，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺細(xì)胞中的let－7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌”知，導(dǎo)入let－7基因后，肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制；據(jù)圖2可知，let－7基因影響RAS基因表達(dá)的機(jī)理是：let－7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制。

考點：本題主要考查學(xué)生基因工程、細(xì)胞工程的相關(guān)知識，意在使學(xué)生能理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。