Question

【題目】某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題。

（1）將含有目的基因的DNA與質粒分別用Sal I酶切，酶切產物用_____________催化連接后，兩個DNA片段的連接結果有_______種。

（2）在構建重組質粒時，應選用______酶和________酶，對_______進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（3）為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養基中加入________________，理由是_______。

（4）將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用__________________技術，愈傷組織經________進而形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加________。

Answer 1

【答案】 DNA連接酶 3 SalⅠ HindⅢ 質粒和含抗鹽基因的DNA 氨芐青霉素 重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環素基因被破壞 植物組織培養 細胞增殖和分化 生長素和細胞分裂素

【解析】【試題分析】

解答本題的關鍵是理解基因工程的操作步驟以及植物組織培養的過程——脫分化和再分化。

1.由于抗四環素基因被限制酶切斷而不起作用，故導入了重組質粒的農桿菌能在含氨芐青霉素的培養基上生長，卻不能在含四環素的培養基上生長。

2．要將單個的細胞培育成完整的植株需要利用植物組織培養技術，愈傷組織通過細胞分化和細胞增殖發育成完整植株。在植物組織培養過程中植物激素（生長素和細胞分裂素）起著關鍵性的作用，當生長素與細胞分裂素含量相當時，有利于脫分化，當生長素大于細胞分裂素時，有利于生根，當生長素含量小于細胞分裂素時，有利于生芽。

（1）將DNA片段連接起來用的是DNA連接酶；兩個DNA片段的連接存在質粒與質粒連接、質粒與目的基因連接、目的基因與目的基因連接3種連接方式。

（2）根據圖中限制酶的識別位點，BamHⅠ會切斷目的基因，故應選用SalⅠ和Hind Ⅲ對質粒、含抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（3）由于抗四環素基因被限制酶切斷而不起作用，即重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環素基因被破壞，所以為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養基中加入氨芐青霉素。

（4）將單個的細胞培育成完整的植株需要利用植物組織培養技術；愈傷組織經細胞增殖和分化進而形成完整植株；此過程除營養物質外還必須向培養基中添加生長素和細胞分裂素。