Question

【題目】金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結合蛋白，某研究小組計劃通過多聚酶鏈式反應（PCR）擴增獲得目的基因，構建轉基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下，請回答下列問題：
（1）從高表達MT 蛋白的生物組織中提取mRNA，通過獲得用于PCR擴增。
（2）設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物（引物1和引物2），為方便構建重組質粒，在引物中需要增加適當的位點。設計引物時需要避免引物之間形成 ， 而造成引物自連。
（3）圖中步驟1代表 ， 步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個步驟組成一輪循環。
（4）PCR擴增時，退火溫度的設定是成敗的關鍵。退火溫度過高會破的堿基配對。退火溫度的設定與引物長度、堿基組成有關，長度相同但的引物需要設定更高的退火溫度。
（5）如果PCR反應得不到任何擴增產物，則可以采取的改進措施有（填序號：①升高退火溫度 ②降低退火溫度 ③重新設計引物）。

Answer 1

【答案】
（1）逆轉錄；cDNA
（2）限制性核酸內切酶；堿基互補配對
（3）變性
（4）引物與模板；GC含量高
（5）②③
【解析】