Question

【題目】下圖是某科研所以小鼠為材料制備某抗原的單克隆抗體及研究胚胎干細(xì)胞分化條件的流程圖。請回答相關(guān) 問題：

（1）①過程需用__________處理以將組織分散成單個(gè)細(xì)胞。圖中選用的A細(xì)胞一般是傳代__________的細(xì)胞。圖中去核卵母細(xì)胞是通過__________法去除卵母細(xì)胞中的核得到的。

（2）胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上的特點(diǎn)是____________________。③過程需要向培養(yǎng)液中加入________，如牛磺酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)，從而誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化。

（3）④過裎常用的生物誘導(dǎo)因素是__________________。④過程中產(chǎn)生的融合細(xì)胞的類型有_______（用YY細(xì)胞表述）。

（4）簡述⑤過程中要進(jìn)行哪兩次篩選？_________________________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶或膠原蛋白酶 10代以內(nèi) 顯微操作 體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯 分化誘導(dǎo)因子 滅活的病毒 X自身融合細(xì)胞、Y自身融合細(xì)胞、X—Y融合細(xì)胞 —次是通過具有篩選作用的培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，另一次是通過抗原一抗體雜交篩選出能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞

【解析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖；取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)；單克隆抗體的制備過程：制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞→獲得雜交瘤細(xì)胞→克隆化培養(yǎng)和抗體檢測→將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖→提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

詳解（1）動(dòng)物組織細(xì)胞之間含有多種胞外蛋白，如膠原蛋白，使細(xì)胞間或細(xì)胞與培養(yǎng)瓶內(nèi)壁粘連起來，因此①過程需用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞。核移植時(shí)選擇的供核一方一般是傳代10代以內(nèi)細(xì)胞，原因是細(xì)胞能保持正常的二倍體核型（遺傳物質(zhì)不發(fā)生改變）。圖中去核卵母細(xì)胞是通過顯微操作法去除卵母細(xì)胞中的核得到的。

（2）胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，在形態(tài)上，表現(xiàn)為體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞。③過程是誘導(dǎo)細(xì)胞分化的過程，需要向培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛磺酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)，從而誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化。

（3）④過裎為誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過程，常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒。④過程中產(chǎn)生的融合細(xì)胞的類型有X自身融合細(xì)胞、Y自身融合細(xì)胞、X—Y融合細(xì)胞。

（4）⑤過程是單克隆抗體的篩選過程，融合的結(jié)果是有很多不符合要求的；如有B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞等，所以要進(jìn)行兩次篩選，—次是通過具有篩選作用的培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，另一次是通過抗原一抗體雜交篩選出能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。