Question

【題目】綠色熒光蛋白（GFP)會發出綠色熒光，該蛋白質在生物工程中有著廣闊的應用前景。請據圖回答相關問題：

（1）形成重組質粒時，如果限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC—，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC—。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因兩側各有一個酶Ⅱ的切點。在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質粒和目的基因連接起來？_____________理由是__________。

（2）構建重組質粒時，限制酶切點應位于_____________和_____________之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達。寫山該基因表達過程包含的信息傳遞圖解：______________________。

（3）在②過程進行轉基因體細胞的篩選時的方法是_______________________。

（4）在核移植過程中，乙兔提供的細胞應是______________________。

（5）通過推測氨基酸排序，可以找到______________，造出能吸收、發出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發光更久、更強烈。

Answer 1

【答案】 可以連接 由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補） 啟動子 終止子 轉基因細胞發出綠色熒光 減數第二次分裂中期（次級）卵母細胞 對應脫氧核苷酸序列

【解析】試題分析：可以看出該熒光克隆兔涉及了多項生物工程技術．首先導入目的基因的甲兔的成纖維細胞要經過動物細胞培養篩選出轉基因體細胞，然后該細胞與乙兔的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞，重組細胞經過早期胚胎培養到桑葚胚或囊胚期，最后經過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母兔子宮內，最后生成熒光克隆兔．該過程中利用基因工程、動物細胞培養、細胞核移植、早期胚胎培養和胚胎移植等技術。

（1）①限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，因此質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：．

②限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-，因此目的基因兩側被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端為：．

③限制性內切酶Ⅰ和限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點不同，但兩種切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA連接酶的作用下連接起來，形成重組DNA分子. 。

（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，終止子的作用是使轉錄在所需要的地方停止，所以構建重組質粒時，限制酶切點應位于啟動子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達．該基因表達過程包含的信息傳遞圖解：。

（3）在②過程進行轉基因體細胞的篩選時，比較簡易的篩選方法是轉基因細胞能否發出綠色熒光。

（4）在核移植過程中，乙兔提供的細胞應是減數第二次分裂中期（次級）卵母細胞。

（5）通過推測氨基酸排序，可以找到 對應脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發光更久、更強烈。