Question

【題目】人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發酵處理秸稈，提高秸稈的利用價值．為了增強發酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究．

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是（ ）（多選）
A.酒精燈
B.培養皿
C.顯微鏡
D.無菌水
E.接種環
（2）在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 ．
（3）剛果紅（CR溶液）可以與纖維素形成紅色復合物，不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發生這種反應．表是兩種培養基的配方，“+”表示有，“﹣”表示無．

	酵母膏	無機鹽	淀粉	纖維素粉	瓊脂	CR溶液	水
培養基甲	+	+	+	+	﹣	+	+
培養基乙	+	+	+	﹣	+	+	+

據表判斷，培養基甲能否用于分離和鑒別纖維素分解菌？回答并說明理由；培養基乙能否用于分離和鑒別纖維素分解菌？回答并說明理由 ．
（4）研究人員在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落（如圖1）．圖中降解圈大小與纖維素酶的有關．圖中降解纖維素能力最強的菌株是 ．
（5）研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株A和B，在不同溫度和pH條件下進行發酵測得發酵液中酶活性（Ug﹣1protein）的結果如圖2，推測菌株更適合用于人工瘤胃發酵，理由是 ．

Answer 1

【答案】
（1）CE
（2）培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果
（3）不能，沒有瓊脂，液體培養基無法分離和鑒別菌種；不能，沒有纖維素粉作為（唯一）碳源
（4）量和活性；菌2
（5）B；發酵過程中會產熱和產酸，B菌在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高
【解析】解：（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，需要使用酒精燈對涂布器進行滅菌，倒平板需要使用培養皿，稀釋菌液需要使用無菌水，涂布平板時需要使用涂布器，不需要使用接種環，也不需要使用顯微鏡．故選：CE．（2）在涂布平板時，由于培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果，所以滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多．（3）據表分析，培養基甲沒有瓊脂，液體培養基無法分離和鑒別菌種，不能用來分離和鑒別纖維素分解菌．培養基乙捕食以纖維素為唯一碳源的選擇培養基，不能用來進行分離和鑒別纖維素分解菌．（4）在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落，降解圈大小與纖維素酶的多少和活性有關．纖維素酶的量越多，活性越強，分解的纖維素越多，透明降解圈越大，所以圖中降解纖維素能力最強的菌株是菌2．（5）據圖2分析，發酵過程中會產熱和產酸，B菌在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高，所以菌株B更適合用于人工瘤胃發酵．
故答案為：（1）CE（2）培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果（3）不能，沒有瓊脂，液體培養基無法分離和鑒別菌種 不能，沒有纖維素粉作為（唯一）碳源（4）量和活性 菌2（5）B 發酵過程中會產熱和產酸，B菌在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高
微生物培養的關鍵是無菌操作．微生物培養過程中除考慮營養條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件，需對培養基和培養皿進行消毒．可以通過稀釋涂布平板法或顯微鏡計數法進行統計計數．
剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌．剛果紅可以在細菌菌落形成前倒平板時加入，也可以在菌落形成后加入．若在細菌菌落形成前倒平板時加入剛果紅，則所加剛果紅要進行滅菌，以防雜菌的侵入，影響纖維素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入剛果紅，則不需要滅菌．