Question

8．(江蘇省黃橋中學2012屆高三月考)組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造。科學家在體外構建的大腸桿菌的一種質粒只有某限制酶的一個識別序列，位于該質粒的lacZ基因中。lacZ基因若無外源基因插入，便可表達出半乳糖苷酶。當培養基中含有兩種物質I和X時，X便會被半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有該種質粒的大腸桿菌便不能表達半乳糖苷酶，培養基中的X不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落。體外構建的這種大腸桿菌質粒還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。下圖是利用lacZ基因的插入失活、篩選出重組質粒的示意圖。據圖回答下列問題：

        

(1)作為受體大腸桿菌應______________(填“含有”或“不含”)氨芐青霉素抗性基因，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，完成基因工程操作的______________________________步驟。

(2)圖中的選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入__________________________________等物質，用以篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌。

(3)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養基上培養，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質粒，請預測菌落的顏色，并分析結果：

①_______________________________________________。

②_______________________________________________。

(4)若改用噬菌體為運載體，科學家分別用³²P、³⁵S標記噬菌體內的目的基因、外殼，在下圖中標記元素³²P、³⁵S所在部位依次是________________(填圖中標號)。

Answer 1

答案：(1)不含　目的基因導入受體細胞

(2)I、X、氨芐青霉素

(3)①如果長出藍色菌落，說明沒有與目的基因重組的質粒已轉入受體菌(或說明重組質粒沒導入受體大腸桿菌)

②如果長出白色菌落，說明重組質粒已導入受體大腸桿菌

(4)①、④

解析：(1)標記基因是氨芐青霉素基因，受體細胞不應有該標記基因。該步驟是將目的基因導入受體細胞。(2)該選擇培養基中除營養物質外，還應該有氨芐青霉素起選擇作用和I、X起指示作用。(3)若導入了重組質粒，LacZ基因被破壞，不能表達，X不會水解成藍色；若未導入，X會水解形成藍色菌落。(4)³²P存在于脫氧核苷酸的磷酸基中，³⁵S存在于蛋白質的R基中。(5)效應T細胞與靶細胞密切接觸，使靶細胞裂解死亡。