Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中，經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖1所示）

（1）圖1中,為達到篩選目的,平板內的固體培養基應以 作為唯一碳源。②、③過程需重復幾次,目的是 。

（2）某同學嘗試過程③的操作,其中一個平板經培養后的菌落分布如圖2所示。該同學的接種方法是 ；推測該同學接種時可能的操作失誤是 。

（3）以淀粉為原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發酵,發酵罐需要先排氣,其原因是 。

（4）上述工程酵母菌培養過程中，有關操作正確的是

A．玻璃刮刀用火焰灼燒進行滅菌

B．培養基分裝到培養皿后進行滅菌

C．倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進行

D．獲得的菌種如果需要保存，可置于37℃恒溫保存

（二）下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用 兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過 酶作用后獲得重組質粒。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養基中添加 。

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。

（4）若用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段。

（5）基因工程中，某些噬菌體經改造后可以作為載體，其DNA復制所需的原料來自于 。

Answer 1

【答案】（一）（1）淀粉 篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種

（2）涂布分離法 涂布不均勻

（3）工程酵母菌利用淀粉的速度很快，發酵產生CO2的速度也很快

（4）C

（二）（1）Bcll和Hindlll DNA連接 （2）四環素

（3） 都不能 （4）7 （5）受體細胞

【解析】（一）（1）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養基可以選出工程酵母菌；②、③過程重復幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌（或篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種）。

（2）由圖2可知，該同學采用的接種方法是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好的分散開來，可能是涂布不均勻導致的。

（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即將淀粉分解產生葡萄糖的能力強，導致酒精發酵速率快，產生二氧化碳的速率更快，所以接種工程酵母菌的發酵罐要先排氣。

（4）玻璃刮刀用火焰灼燒進行滅菌可能改變刮刀剛度，A項錯誤；培養基應在分裝前進行滅菌，B項錯誤；倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進行，C項正確；獲得的菌種如果需要保存，一般置于4-6℃下保存，D項錯誤。

（二）（1）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamH I酶可能使質粒中的啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割；酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質粒。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據質粒上的抗性基因，應在平板培養基中添加四環素。

（3）根據BamH I和Bcl I酶切位點，BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為；與兩種酶的酶切位點均不同，所以對于該部位，這兩種酶都不能切開。

（4）根據BamH I、Bcl I和Sau3A I的酶切位點，Sau3A I在質粒上有3個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。

（5）噬菌體不能獨立生活，必需依賴活細胞才能生存，所以其作為載體，其DNA復制所需的原料來自所導入的受體細胞。