Question

【題目】人參是一種名貴藥材，具有良好的滋補作用。口服α-干擾素在慢性乙肝、丙肝及部分腫瘤的治療中有一定療效。下圖為科研人員制備能合成干擾素的人參愈傷組織細胞的流程，①～④表示相關的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ為限制酶，它們的識別序列及切割位點如表所示。請回答下列問題：

（1）步驟①中，利用PCR技術擴增干擾素基因時，設計引物序列的主要依據是_________________。科研人員還在兩種引物的一端分別加上了______________和_____________序列，以便于后續的剪切和連接。

（2）過程②所構建的基因表達載體中未標注出的必需結構還有_________________，過程③中需先用_________處理農桿菌，以便將基因表達載體導入細胞。

（3）過程④中，科研人員提取愈傷組織細胞的RNA后，先通過________________過程獲得DNA，再進行PCR擴增，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是______________________________________。

（4）治療中發現，用于口服的α-干擾素在胃中會受到一定程度的破壞，影響其功效，需要利用__________________________技術加以改造，以達到滿意效果。

Answer 1

【答案】

（1）干擾素基因兩端的部分核苷酸序列 GAATTC GGATCC

（2）復制原點 Ca2+

（3）逆轉錄 干擾素基因未能導入人參愈傷組織細胞或導入人參愈傷組織細胞的干擾素基因未能轉錄（4）蛋白質工程

【解析】

（1）設計引物序列的主要依據是干擾素基因兩端的部分核苷酸序列。后期需要用限制酶進行切割，所以在兩種引物的一端分別加上了GAATTC和GGATCC序列。

（2）構建的基因表達載體中還需要復制原點。過程③中需先用Ca2+理農桿菌以便將基因表達載體導入細胞。

（3）RNA通過逆轉錄形成DNA，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是干擾素基因未能導入人參愈傷組織細胞或導入人參愈傷組織細胞的干擾素基因未能轉錄

（4）對α-干擾素進行改造需要利用蛋白質工程