Question

【題目】如圖為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的片段的示意圖．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割的位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離，1Kb=1000個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）質(zhì)粒A、C不能作為目的基因運(yùn)載體的理由分別是____________________，__________________。

（2）將圖中的目的基因與質(zhì)粒B進(jìn)行重組，需要用到_____________________________酶．如果是兩兩重組，可能有_________________種長(zhǎng)度的重組結(jié)果。

（3）基因工程中檢測(cè)篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒是一個(gè)重要的步驟�，F(xiàn)運(yùn)用_____________酶切質(zhì)粒，完全酶切后進(jìn)行電泳觀察，若出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.1kb和____________kb，或者___________kb和__________kb的片段，則可以判斷該質(zhì)粒已與目的基因重組成功（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)之間的堿基對(duì)忽略不計(jì)）。

（4）基因治療包括___________________和_________________。

Answer 1

【答案】 缺少標(biāo)記基因 復(fù)制原點(diǎn)被限制酶切割 限制酶（PvuⅠ）和DNA連接酶 3 EcoRⅠ 5.6 3.1 3.6 體外基因治療 體內(nèi)基因治療

【解析】試題分析：本題考查基因工程，考查對(duì)質(zhì)粒特點(diǎn)、限制酶使用、基因表達(dá)載體構(gòu)建方法的理解。解答此題，可根據(jù)目的基因兩端限制酶的識(shí)別、切割位點(diǎn)選擇合適的限制酶和質(zhì)粒，根據(jù)目的基因插入質(zhì)粒時(shí)兩種不同的方向和PvuⅠ和EcoRⅠ識(shí)別、切割位點(diǎn)判斷用EcoRⅠ酶切重組質(zhì)粒后形成的片段大小。

（1）據(jù)圖可知，目的基因兩端含有PvuⅠ的識(shí)別、切割位點(diǎn)，切割目的基因需使用PvuⅠ，質(zhì)粒A中不含有標(biāo)記基因，質(zhì)粒 C中復(fù)制原點(diǎn)含有PvuⅠ的識(shí)別、切割位點(diǎn)，因此均不能作為目的基因運(yùn)載體。

（2）將目的基因與質(zhì)粒B進(jìn)行重組，需要用同種限制酶切割，以產(chǎn)生相同的黏性末端，應(yīng)使用PvuⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，然后用DNA連接酶進(jìn)行連接。如果是兩兩重組，可得到目的基因與目的基因連接、目的基因與質(zhì)粒B連接、質(zhì)粒B與質(zhì)粒B連接三種連接產(chǎn)物，據(jù)圖可知，目的基因長(zhǎng)度為4.0kb，質(zhì)粒B大小為2.7kb，則可能有8.0kb、5.4kb、6.7kb三種長(zhǎng)度的重組結(jié)果。

（3）據(jù)圖可知，目的基因和質(zhì)粒B中均含有EcoRⅠ識(shí)別、切割位點(diǎn)，若質(zhì)粒與目的基因重組成功，則重組質(zhì)粒大小為6.7kb，含有兩個(gè)EcoRⅠ識(shí)別、切割位點(diǎn)，質(zhì)粒B中PvuⅠ和EcoRⅠ識(shí)別、切割位點(diǎn)之間有0.1kb大小的片段，根據(jù)目的基因中EcoRⅠ識(shí)別、切割位點(diǎn)的位置，用EcoRⅠ酶切重組質(zhì)粒，應(yīng)產(chǎn)生兩種大小的片段，完全酶切后進(jìn)行電泳觀察，若出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.1kb的片段，則還應(yīng)有5.6kb的一種片段。考慮目的基因插入的方向不同，還可能有3.1kb和3.6kb兩種大小的片段。

（4）根據(jù)向人體細(xì)胞轉(zhuǎn)移目的基因發(fā)生在體內(nèi)還是體外，基因治療分為體外基因治療和體內(nèi)基因治療。