Question

【題目】嗜熱土壤芽孢桿菌產生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業生產中更好地應用，利用大腸桿菌表達BglB酶，開展了以下試驗。（圖中啟動子與RNA聚合酶結合，終止子是給予RNA聚合酶轉錄終止信號的DNA序列）

（1）______擴增bglB基因時，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。

（2）如圖為質粒限制性核酸內切酶切圖譜，為使獲得的bglB基因與質粒載體連接，bglB基因兩端需分別含有______和______不同限制酶的識別序列

（3）將重組DNA分子導入受體細胞，為了促進該過程，應該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是______。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述構建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為______。

（5）下列有關限制性核酸內切酶的敘述中正確的是______

A．用限制性核酸內切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有2個

B．限制性核酸內切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現的概率就越大

C．-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸內切酶切出的粘性末端堿基數不同

D．只有用相同的限制性核酸內切酶處理含目的基因的片段和質粒，才能形成重組質粒

Answer 1

【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大腸桿菌細胞壁的通透性 轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 B

【解析】

基因工程的一般步驟：提取目的基因；目的基因與運載體結合；將目的基因導入受體細胞；目的基因的檢測和表達。

（1）PCR技術可在體外大量擴增目的基因。

（2）圖中質粒上有多個限制性核酸內切酶的切割位點，但用PstⅠ切割會破壞抗生素抗性基因（標記基因），用KpnⅠ切割會破壞復制原點，用XbaⅠ切割會去除終止子，用EcoRⅠ切割會破壞終止子，用HindⅠ切割會破壞啟動子，為使獲得的bglB基因與質粒載體連接，為了防止目的基因和運載體自身環化，應該用兩種限制酶切割，則bglB基因兩端需分別含有NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識別序列。

（3）將重組DNA分子導入受體細胞，為了促進該過程，應該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是增加大腸桿菌細胞壁的通透性，是大腸桿菌處于感受態。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述構建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。

（5）A、用限制性核酸內切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有4個，A錯誤；

B、限制性核酸內切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現的概率就越大，B正確；

C、-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸內切酶切出的粘性末端堿基數相同，都是4個，C錯誤；

D、用不同的限制性核酸內切酶處理含目的基因的片段和質粒，也能形成重組質粒，D錯誤