Question

【題目】如圖為利用人成纖維細胞(具分裂能力、能在HAT培養基上存活)和小鼠骨髓瘤細胞(具分裂能力、不能在HAT培養基上存活)進行人類基因定位的操作示意圖，請回答相關問題。

		雜交細胞
		A	B	C
人類 染色體	1	－	＋	＋
	2	＋	－	＋
	3	＋	＋	－
酶	m	＋	－	＋
	n	－	＋	＋
	p	＋	－	＋
	q	－	＋	＋

(1)圖示方法是__________技術的應用，該技術的基礎是____________技術。

(2)操作所用的成纖維細胞應傳代________代以內，誘導融合時需要加入的促融劑是_____。

(3)人、鼠細胞先經過細胞膜融合形成________細胞，再經過一次_________，形成單核細胞。

(4)HAT培養基起________培養作用，培養時溫度應為________℃，操作中加入烏本苷的目的是____________________________。

(5)如表所示為雜交細胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4種酶(“＋”表示存在，“－”表示不存在)，這4種酶均為單基因編碼產生，據表判斷，編碼________酶的基因位于染色體2上，排列方式呈________。

Answer 1

【答案】(1)動物細胞融合 動物細胞培養

(2)10 PEG(或滅活病毒)

(3)多核 有絲分裂

(4)選擇 36.5±0.5 除去未發生融合的細胞（出去成纖維細胞）

(5)m和p線性

【解析】（1）由圖分析，該過程為動物細胞融合，其基礎是動物細胞培養。

（2）目前使用的正常細胞通常為10代以內的，可以保持細胞正常的二倍體核型。誘導兩個動物細胞融合，原理是細胞膜的流動性；可以采用物理（離心、振動）、化學（PEG）、生物誘導（滅活的病毒）融合方法，其中區別于植物原生質體融合的是生物誘導融合中采用的滅活病毒。

（3）成纖維細胞能在HAT培養基上存活，小鼠骨髓瘤細胞不能在HAT培養基上存活，說明HAT培養基屬于選擇培養基，其中需要加入血漿等天然物質。

（4）培養動物細胞時一般pH設置為7.2-7.4；誘導細胞融合后，培養基中會出現3中融合細胞，成纖維細胞自身融合、骨髓瘤細胞自身融合和雜交瘤細胞，為了除去成纖維細胞，則需要在培養基中加入烏本苷。

（5）據表判斷，雜交細胞A中存在2和3號染色體，表達出酶m和p；雜交細胞B存在1和2號染色體，表達出酶n和q；說明編碼m和p酶的基因位于染色體2上，且呈線性排列。