Question

【題目】如圖表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖右表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI　4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．
（1）圖左DNA分子中的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)脫氧核苷酸之間由（化學(xué)鍵）連接．
（2）若用限制酶SmaI完全切割圖中含有目的基因D的DNA片段，其產(chǎn)物長(zhǎng)度分為 ．
（3）為了提高試驗(yàn)成功率，需要通過(guò)技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．在目的基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，加入的引物有A、B兩種，引物的作用是 ， 若該目的基因擴(kuò)增n代，則其中含有A、B引物的DNA分子有個(gè)．
（4）若將圖右中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 ． 經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最有可能的原因是 ．
（5）導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞，經(jīng)過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到幼苗，該技術(shù)利用的原理是 ．

Answer 1

【答案】
（1）磷酸二酯鍵
（2）537、790、661
（3）PCR；使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始復(fù)制；2n﹣2
（4）BamH1；同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接
（5）植物細(xì)胞具有全能性
【解析】解：（1）DNA分子中的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)脫氧核苷酸之間由磷酸二酯鍵連接．（2）根據(jù)圖1中的酶切位點(diǎn)，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為537bp、790bp、661bp．（3）為了提高試驗(yàn)成功率，需要通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始復(fù)制．PCR技術(shù)運(yùn)用了DNA復(fù)制的原理，因此目的基因擴(kuò)增n代后產(chǎn)生子代DNA分子2n．又由于親代DNA分子的兩條鏈中不含引物，因此含有A、B引物的DNA分子有2n﹣2 個(gè)．（4）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會(huì)被破壞目的基因D；運(yùn)載體的兩個(gè)標(biāo)記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點(diǎn)，用該酶切割會(huì)破壞這兩個(gè)標(biāo)記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和運(yùn)載體．由于同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接，這樣會(huì)導(dǎo)致部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)．（5）植物組織培養(yǎng)技術(shù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性．

所以答案是：（1）磷酸二酯鍵；（2）537、790、661 ；（3）PCR；使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始復(fù)制；2n﹣2；（4）BamH1；同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接；（5）植物細(xì)胞具有全能性

【考點(diǎn)精析】關(guān)于本題考查的基因工程的原理及技術(shù)，需要了解基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能得出正確答案．