Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于工業廢水中，對環境有嚴重危害．小明同學準備依據圖1操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株．請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有___．

（2）將采集到的樣品接種培養，苯酚用量應隨轉接次數增加而逐漸__．以達到富集酚降解菌的目的．若圖1平板中菌落過于密集，應進一步___________，以便于菌落計數與分離．制備平板培養基時除了需要水、營養物質外，還必須添加 ___________ ．

（3）小明同學利用平板劃線法純化酚降解菌,他在培養基上共劃了5個區域,則需要__________次(填數字)灼燒接種環.

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量．先制作系列濃度梯度并進行顯色反應，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應分別為__________________．

管號	1	2	3	4	5	6
苯酚濃度（mg/L）						1

如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_______（填序號：①5②10③20）倍后，再進行比色．

Answer 1

【答案】 蛋白胨、苯酚 增加 稀釋涂布 凝固劑（瓊脂） 6 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③

【解析】 稀釋涂布平板法和平板劃線法接種目的菌進行分離、純化，前者主要應用于對目的菌進行計數，通過形成菌落來估算，后者僅僅是純化菌種，但也需要挑選單菌落，所以二者都需要在固體培養基上完成培養。為了防止操作中、操作后造成雜菌污染，所以應注意每個環節中盡可能做到無菌操作，如對接種環的灼燒，在酒精燈的火焰旁進行接種環操作等等。

（1）從培養基內的成分來看，只有蛋白胨和苯酚內含有碳元素，因此可以作為碳源。

（2）因為最終要獲得的菌株為可以高效降解酚的菌株，所以苯酚的用量應隨轉接次數增加而逐漸增加；稀釋涂布平板法可以分離密集菌落，同時便于菌落的計數；平板培養基為固體培養基，在制備時除應加入的水及其他營養物質后，還需加入凝固劑（瓊脂）。

（3）用平板劃線法純化目的菌（酚降解菌）,為了防止雜菌污染，每次劃線前都要進行灼燒接種環，且最后依次劃線結束后，為了防止菌種污染環境，還要再次灼燒接種環，所以5次劃線，需要灼燒6次接種環。

（4）題干中提到要制作系列濃度梯度進行顯色反應，共配制了六支比色管，所以六支比色管的濃度值依次分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1；廢水中含有50mg/L 苯酚溶液，降解后剩余21%，則剩余中含有10.5mg/L 苯酚溶液，經過5倍或10倍稀釋后分別為2.1mg/L 和1.05mg/L ，不在比色區間內，而20倍稀釋后濃度為0.5mg/L ，在比色區間內，因此要稀釋20倍后再進行比色。