Question

【題目】如圖是利用β﹣乳球蛋白（BLG）基因5′端調控序列和人乳鐵蛋白（hLF）基因構建能在羊乳腺細胞特異性表達的運載體的簡要流程圖，請據圖回答下列問題：
（1）②為PCR過程，除了要加入引物、原料外還需要加入 ， 在此過程中引物的作用是 ．
（2）BamH I的識別序列為﹣G↓GATTC﹣，Hind III的識別序列為﹣A↓AGCTT﹣，選用這兩種酶進行操作的意義是 ， 除此之外，③過程還需要酶．
（3）BLG基因5′端調控序列能使hLF基因在羊的乳腺細胞中特異性表達，這是因為 ．
（4）要獲得能表達目的基因的羊，應將重組質粒導入羊的（填“乳腺細胞”或“去核卵細胞”、“受精卵”），獲得優良胚胎后，為了提高胚胎的利用率，常采用的方法來處理胚胎．

Answer 1

【答案】
（1）耐高溫的DNA聚合酶、模板；使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸
（2）避免目的基因和運載體產生的末端任意連接（環化連接）； DNA連接
（3）BLG基因5′端調控序列作為啟動子,是RNA聚合酶識別和結合的部位,能驅動hLF基因轉錄出mRNA
（4）受精卵；胚胎分割
【解析】解：（1）PCR技術的條件：模板DNA（目的基因）、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶），其中引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸．（2）BamH I的識別序列為﹣G↓GATTC﹣，Hind III的識別序列為﹣A↓AGCTT﹣，選用這兩種酶進行操作時產生的黏性末端不同，這樣可以避免目的基因和運載體產生的末端任意連接（環化連接）；③為基因表達在的構建過程，該過程首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次還需要DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA．（3）BLG基因5′端調控序列能使hLF基因在羊的乳腺細胞中特異性表達，這是因為BLG基因5′端調控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動hLF基因轉錄出mRNA．（4）培育轉基因動物時，應該以受精作為受體細胞，因為受精卵的全能性最高，且具有促進全能性表達的物質；來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質，因此為了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法來處理胚胎．

所以答案是：（1）耐高溫的DNA聚合酶、模板 使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸 （2）避免目的基因和運載體產生的末端任意連接（環化連接） DNA連接（3）BLG基因5′端調控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動hLF基因轉錄出mRNA （4）受精卵 胚胎分割

【考點精析】利用基因工程的原理及技術對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術．