Question

ch1L基因是藍藻擬核DNA上與葉綠素合成有關的基因。為研究該基因對葉綠素合成的控制，需要構建該種生物缺失ch1L基因的變異株細胞。構建過程如下：
第①步：用PCR技術從藍藻環狀DNA中擴增出ch1L基因片段。
第②步：將ch1L基因與質粒構建形成重組質粒1。
第③步：將重組質粒1中ch1L基因中部0.8kb片段刪除，用一段紅霉素抗性基因取代之，得到重組質粒2。
第④步：將重組質粒2導入藍藻細胞，由于改造后的基因與ch1L基因仍有很長的序列相同，所以能準確地與其發生同源重組，產生出缺失ch1L基因的突變株。

請根據上述資料，回答下列問題：
(1)第①步用PCR技術擴增DNA片段時用到的耐高溫的酶通常是指什么酶？________。PCR擴增DNA時必須加入引物，其作用是_____________。
(2)利用PCR技術擴增DNA一般要經過三十多次循環，每次循環都要經過三個步驟，其中“復性”這一步驟發生的變化是________________。
(3)構建重組質粒1、2時，為保證成功率，往往使用_________酶對基因和質粒進行切割，以切出相同的黏性末端，便于連接。此酶的作用是將DNA分子的___________鍵打開。
(4)質粒是基因工程中最常用的運載體，其化學本質是________，此外還可用噬菌體、動植物病毒作用為運載體。
(5)導入重組質粒2以后，往往還需要進行檢測和篩選，可用________制成探針，檢測是否導入了重組基因，在培養基中加入_______________可將變異株細胞篩選出來。

Answer 1

(1)TaqDNA聚合酶    與模板結合，使DNA聚合酶從引物3′端延伸DNA鏈
(2)引物通過堿基互補與DNA模板鏈結合
(3)同一種DNA限制性內切酶    磷酸二酯鍵
(4)小型環狀DNA
(5)紅霉素抗性基因     紅霉素