Question

【題目】透明質酸酶在臨床上常用作藥物滲透劑，目前主要從動物組織中提取。科研人員嘗試將透明質酸酶基因轉入大腸桿菌，使其得到高效表達。下圖中NcoⅠ和XhoⅠ為限制酶，重疊延伸PCR是一種定點突變技術。據圖回答下列問題：

（1）步驟①的目的是為了保護____________，PCR的原理是____________；PCR擴增的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后____________，如此重復循環。

（2）若圖中的透明質酸酶基因來自cDNA文庫，則在進行步驟②之前需在其前、后端分別接上特定的____________，否則該基因就不能轉錄。步驟②需要用____________（酶）切割質粒。

（3）圖中A是____________；早期實驗人員利用大腸桿菌作為受體，后來發現用毛霉或酵母菌作受體更具優勢，從生物體結構角度分析，最可能的原因是______________________。

（4）目的基因導入受體細胞后，是否可以穩定地維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測和鑒定才能知道。檢測轉基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是________________________。

Answer 1

【答案】 透明質酸酶基因，防止NcoⅠ限制酶破壞目的基因 DNA雙鏈復制 在DNA聚合酶作用下延伸 啟動子、終止子 NcoⅠ和XhoⅠ 基因表達載體 毛霉或酵母菌是真核細胞，有內質網和高爾基體加工 利用目的基因制作成的探針進行DNA分子雜交

【解析】試題分析：本題考查了基因工程的有關知識，要求學生能夠掌握基因工程的工具以及工具酶的作用部位，掌握基因工程的原理和操作步驟，掌握PCR技術定點誘變的原理，再結合所學知識準確答題。

（1）分析圖解可知，圖中目的基因的中間存在NcoI限制酶的切割位點，因此步驟①的目的是為了保護透明質酸酶基因，防止NcoⅠ限制酶破壞目的基因，PCR的原理是DNA雙鏈復制；PCR擴增的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶作用下延伸，如此重復循環。

（2）基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端，因此在進行步驟②之前需在透明質酸酶基因前、后端分別接上特定的啟動子、終止子，否則該基因就不能轉錄。步驟②需要用NcoⅠ和XhoⅠ切割質粒。

（3）據圖可知，圖中A是基因表達載體，早期實驗人員利用大腸桿菌作為受體，后來發現用毛霉或酵母菌作受體更具優勢，從生物體結構角度分析，最可能的原因是毛霉或酵母菌是真核細胞，有內質網和高爾基體加工。

（4）目的基因導入受體細胞后，是否可以穩定地維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測和鑒定才能知道。檢測轉基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是利用目的基因制作成的探針進行DNA分子雜交。

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