Question

【題目】用噬菌體抗體庫技術獲得人的單克隆抗體的方法是：將人抗體基因插入噬菌體載體，然后讓該噬菌體感染大腸桿菌，抗體可能和噬菌體蛋白以融合蛋白的形式附著在噬菌體表面，也可能通過大腸桿菌分泌出去。回答下列問題：

（1）獲取人抗體基因時，可從人的_________細胞中獲取總RNA，反（逆）轉錄成cDNA，再通過PCR技術擴增抗體基因。在PCR反應體系中，需加入________作為合成DNA的原料。

（2）在抗體基因與噬菌體基因之間設計了一個終止密碼子（UAA或UAG或UGA）的對應序列，在終止密碼子突變型的菌株表達時，抗體基因的表達產物是_______（填“融合蛋白”或“分泌型抗體”）。

（3）下圖表示噬菌體抗體庫中編碼某抗體的mRNA的部分堿基序列：

圖中虛線框內mRNA片段包含__________個密碼子，如虛線框后的序列未知，預測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。

（4）在噬菌體抗體庫的構建過程中，理論上可以不利用Ca2+處理大腸桿菌，依據是___________。與利用雜交瘤技術生產的單克隆抗體相比，用該技術省去的步驟是__________，使制備更簡單易行。從噬菌體抗體庫中篩選特異性抗體的方法是__________。

Answer 1

【答案】漿 四種脫氧核苷酸 融合蛋白 8 13 噬菌體可以侵染大腸桿菌，將重組DNA分子注入大腸桿菌 動物細胞融合（或已免疫的B細胞與骨髓瘤細胞融合或漿細胞與骨髓瘤細胞融合） 抗原—抗體雜交（法）

【解析】

本題主要考查基因工程和細胞工程與單克隆抗體制備的相關知識，要求學生熟知基因工程的操作過程、以及單克隆抗體的制備的過程，旨在考查考生的理解能力與知識的綜合運用能力。

（1）抗體基因在效應B細胞（漿細胞）中表達，故應從人的漿細胞中獲取總RNA，反（逆）轉錄成cDNA，再通過PCR技術擴增抗體基因；DNA的原料為四種脫氧核苷酸；

（2）在抗體基因與噬菌體基因之間設計了一個終止密碼子（UAG）的對應序列，終止密碼子為翻譯的終點，由于終止密碼子突變型菌株轉錄的產物無原來設計的終止密碼子，因此抗體基因的表達產物是融合蛋白（抗體和噬菌體的蛋白質）；

（3）mRNA上三個相鄰堿基為一個密碼子，故圖中虛線框內mRNA片段包含8個密碼子；該片段后面的第一個堿基為U，所以后面的密碼子最多可能為4×4=16種，根據題干信息及題中給出的mRNA序列可知，虛線框后第一個密碼子不可能是終止密碼子，故實際上最多有16-3=13種密碼子；

（4）Ca2+處理大腸桿菌的目的是使大腸桿菌易于吸收周圍環境中的DNA分子，但由于噬菌體可以侵染大腸桿菌，可將重組DNA分子注入大腸桿菌，因此在噬菌體抗體庫的構建過程中，理論上可以不利用Ca2+處理大腸桿菌；利用雜交瘤技術生產的單克降抗體，需要對骨髓瘤細胞和B淋巴細胞進行融合，然后篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，但用噬菌體抗體庫技術獲得人的單克隆抗體省去了動物細胞融合環節，使制備更簡單易行；從噬菌體抗體庫中篩選特異性抗體的方法是抗原—抗體雜交（法）。