Question

【題目】糖尿病目前的治療途徑之一是注射胰島素，胰島素A、B鏈分別表達法是生產胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素的基本流程（融合蛋白A、B分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素 A、B鏈融合的蛋白）。請回答下列問題：

（1）根據圖1,基因表達載體中沒有標注出來的基本結構是____________________。

（2）圖1中啟動子是________________酶識別和結合的部位,有了它才能啟動目的基因的表達,氨芐青霉素抗性基因的作用是________________。

（3）人胰島素由A、B兩條肽鏈組成，可裉據組成肽鏈的氨基酸序列,確定編碼胰島素基因的堿基序列,再通過________________方法獲得目的基因。

（4）β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肱鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部,其意義在于________________。

（5）β-半乳糖苷酶中含多個甲硫氨酸,而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸,溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應的融合蛋白的目的是____________。

Answer 1

【答案】（1）終止子

（2）RNA聚合 作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來

（3）人工合成（化學合成）

（4）防止胰島素的A、B鏈被菌體內蛋白酶降解

（5）獲得完整的胰島素的A鏈和B鏈

【解析】（1）基因表達載體的必需組成部分包括啟動子、目的基因、標記基因、終止子，圖中沒有標示終止子 （2）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，氨芐青霉素抗性基因是標記基因，作用是將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來 （3）已知組成肽鏈的氨基酸序列時可以利用人工合成法直接合成DNA （4）β﹣半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部，這樣可以防止胰島素的A、B鏈被菌體內蛋白酶降解．（5）溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵，由于β﹣半乳糖苷酶中含有多個甲硫氨酸，而胰島素的A、B鏈中不含甲硫氨酸，所以用溴化氰處理相應的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈，且β﹣半乳糖苷酸被切成多個肽段．