Question

【題目】如圖所示為農桿菌轉化法示意圖。請回答以下問題：

（1）圖中①過程用到的工具酶的特點是______________________。

（2）圖中②過程用到的工具酶是___________，該過程是基因工程最核心的步驟，即____________。

（3）圖中③過程，需使用___________溶液處理農桿菌，處理的目的是使該細菌處于感受態。

（4）圖中④過程的原理是___________。

（5）檢驗基因工程是否成功。首先應檢測___________，這是外源基因能否在真核細胞內___________的關鍵；其次，利用___________法檢測目的基因是否轉錄出相應的mRNA；最后，利用抗原一抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。

Answer 1

【答案】能識別特定的脫氧核苷酸序列并且在特定位點切割 DNA分子DNA連接酶基因表達載體的構建氯化鈣植物細胞的全能性轉基因生物的染色體上是否插入外源基因穩定遺傳分子雜交

【解析】

圖示為農桿菌轉化法示意圖，圖中①是用限制酶切割雜交質粒的T-DNA片段；②是用DNA連接酶將獲取的外源基因和切割的質粒連接形成重組質粒，也即是基因表達載體的構建過程，是基因工程的核心步驟；③是將重組質粒導入農桿菌中；④是通過植物組織培養技術將侵染有目的基因的外置體培養成轉基因煙草。

（1）根據前面的分析，圖中①過程用到的工具酶是限制酶，該酶的特點是能識別特定的脫氧核苷酸序列并且在特定位點切割DNA分子。

（2）圖中②過程用到的工具酶是DNA連接酶。基因工程最核心的步驟基因表達載體的構建。

（3）將目的基因導入微生物細胞常用感受態轉化法,即用氯化鈣溶液處理該細菌,處理的目的是使該細菌處于感受態。所以圖中③過程，需使用氯化鈣溶液處理農桿菌，處理的目的是使該細菌處于感受態。

（4）圖中④過程是植物組織培養過程，其原理是植物細胞具有全能性。

（5）檢測基因工程是否成功，首先檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因，這是目的基因能否在真核細胞內穩定遺傳的關鍵；其次，利用分子雜交法檢測目的基因是否轉錄出相應的mRNA；最后，利用抗原-抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。