Question

【題目】下表中甲、乙分別是分離兩種土壤中微生物的培養(yǎng)基的配方，圖丙所示為相關(guān)分離過程。請(qǐng)回答下列問題（注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到）：

KH2PO4	1.4g	纖維素粉	5.0g
Na2HPO4	2.1g	NaNO3	1.0g
MgSO4·7H2O	0.2g	Na2HPO4	1.2g
葡萄糖	10.0g	KH2PO4	0.9g
尿素	1.0g	MgSO4·7H2O	0.5g
瓊脂	15.0g	KCl	0.5g
		酵母膏	0.5g
		水解酪素	0.5g
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL		將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL
甲		乙

（1）甲培養(yǎng)基中提供氮源的物質(zhì)是________。

（2）如果將乙培養(yǎng)基配制成固體培養(yǎng)基，則在該培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落是否都能分解纖維素？________（填“是”或“否”）。如果培養(yǎng)基中加入________可以篩選出具有分解纖維素能力的菌株，同時(shí)透明圈越________（填“大”或“小”），表示該菌分解纖維素的能力越強(qiáng)。

（3）為了計(jì)數(shù)微生物的數(shù)量，圖丙采用_______法進(jìn)行接種培養(yǎng)計(jì)數(shù)，除此之外，還可以采用_______法進(jìn)行計(jì)數(shù)。其中前一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果要比后一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果_____（填“大”或“小”）。

（4）一位同學(xué)利用圖丙的方法步驟在4個(gè)平板培養(yǎng)基上分別接種0.1mL土壤稀釋液④，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則每克土壤樣品中微生物數(shù)量約為________________個(gè)。

Answer 1

【答案】尿素 否 剛果紅 大 稀釋涂布平板 顯微鏡直接計(jì)數(shù)（或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)） 小 1.6×108個(gè)

【解析】

本題旨在考查培養(yǎng)基的基本成分，纖維素分解菌的的分離與統(tǒng)計(jì)等知識(shí)。相關(guān)知識(shí)：1稀釋涂布法當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，其統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，計(jì)算公式為每克樣品中的菌株數(shù) = （C÷V）×M。.2.在含有纖維素的培養(yǎng)基中加人剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選出具有分解纖維素能力的菌株；可通過觀察透明圈大小判斷菌株分解纖維素的能力，透明圈越大，纖維素被分解的就越多，說明菌株分解纖維素的能力越強(qiáng)。

（1）培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無(wú)機(jī)鹽。其中氮源一般是含氮的化合物，根據(jù)甲培養(yǎng)基的配方，甲培養(yǎng)基中提供氮源的物質(zhì)是尿素。

（2）如果將乙培養(yǎng)基配制成固體培養(yǎng)基，則在該培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落不一定都能分解纖維素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纖維素被分解后產(chǎn)生的糖類等也可為其它微生物生長(zhǎng)提供碳源等。如果在含有纖維素的培養(yǎng)基中加人剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選出具有分解纖維素能力的菌株；同時(shí)透明圈越大，表示該菌分解纖維素的能力越強(qiáng)。

（3）純化微生物可以用稀釋涂布法和平板劃線法，其中稀釋涂布法能用于微生物的計(jì)數(shù)。稀釋涂布法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。除了上述的活菌計(jì)數(shù)法外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)（或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)）也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。所以，圖丙采用了稀釋涂布法進(jìn)行接種培養(yǎng)計(jì)數(shù)，除此之外，還可以采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。其中前一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果要比后一種計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果小。

（4）為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，稀釋涂布法統(tǒng)計(jì)一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。一位同學(xué)利用圖丙的方法步驟在4個(gè)平板培養(yǎng)基上分別接種0.1mL土壤稀釋液④，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，四個(gè)數(shù)值都符合統(tǒng)計(jì)要求，稀釋倍數(shù)為106倍，則每克土壤樣品中微生物=（180+155+176+129）/4×106=1.6×108個(gè)。