Question

【題目】為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C（圖1），擬將其與質粒（圖2）重組，再借助農桿菌導入菊花中。下列操作與實驗目的不符的是( )

A. 檢測C基因是否整合到菊花染色體上用抗原—抗體雜交方法

B. 用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因導入細胞

C. 在培養基中添加潮霉素，篩選被轉化的菊花細胞

D. 用限制性核酸內切酶EcoRⅠ和連接酶構建重組質粒

Answer 1

【答案】A

【解析】

1、基因工程的基本工具：分子手術刀”--限制性核酸內切酶（限制酶）、“分子縫合針”--DNA連接酶、“分子運輸車”--載體。
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達載體的構建，③將目的基因導入受體細胞，④目的基因的檢測與鑒定。
3、標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素抗性基因。
4、目的基因的檢測和表達：
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。
（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的 抗體進行抗原-抗體雜交。
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定。如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。

根據分析可知，檢測C基因是否整合到菊花染色體上可用DNA分子雜交技術，A錯誤；將目的基因導入到植物細胞，常用農桿菌轉化法，可以將目的基因C導入到農桿菌的Ti質粒的T-DNA段，之后再用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因導入細胞染色體上的DNA上，B正確；標記基因常用來檢測目的基因是否導入受體細胞，圖2中顯示標記基因是潮霉素抗性基因，可在培養基中添加潮霉素，篩選被轉化的菊花細胞，C正確；據圖分析可知，在目的基因的兩端、啟動子和終止子之間都有限制性核酸內切酶EcoRⅠ的切割位點，因此可以用限制性核酸內切酶EcoRⅠ切割目的基因和運載體，之后再用DNA連接酶連接形成基因表達載體，D正確。

故選A。