Question

【題目】篩選大腸桿菌抗鏈霉素突變株的實驗過程如下：

①取一個已經(jīng)滅菌的空培養(yǎng)皿，斜放（一邊墊起）放置，在無菌條件下倒入10mL不含藥物的底層培養(yǎng)基（如圖甲所示）；

②待培養(yǎng)基凝固后將培養(yǎng)皿放平，再倒入10mL含有鏈霉素的上層培養(yǎng)基，這樣便得到鏈霉素濃度從一邊到另一邊逐漸升高的梯度平板（如圖乙所示）；

③用移液管移取經(jīng)誘變處理后的大腸桿菌細(xì)胞懸液0.1mL到梯度平板上，進(jìn)行涂布；

④將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，觀察經(jīng)一次培養(yǎng)的梯度平板上大腸桿菌的生長情況；

⑤選擇如圖丙所示平板上12個生長在梯度平板中部的單個齒落，用無菌接種環(huán)接觸單個菌落朝高藥物濃度的方向劃線；

⑥將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，經(jīng)二次（或多次）培養(yǎng)后，在鏈霉素濃度比較高的部位長出的菌落即為抗鏈霉素突變株

據(jù)此請回答以下問題:

（1）該實驗所用的培養(yǎng)基從用途上看是________培養(yǎng)基，為了使培養(yǎng)基能夠凝固，通常需要在培養(yǎng)基中加入________________。

（2）涂布操作時，涂布器可沾取少量__________在火焰上引燃，進(jìn)行灼燒滅菌。在固體培養(yǎng)基上接種后將平板進(jìn)行_____________培養(yǎng)。

（3）若在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)，則圖丙培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為________。用無菌接種環(huán)接觸單個菌落朝高藥物濃度方向劃線，其目的是______________。

（4）大腸桿菌的抗鏈霉素突變是培養(yǎng)基中的鏈霉素引起的嗎？_______(填“是”“不是”），理由是_____。

Answer 1

【答案】選擇瓊脂酒精倒置黑色測試這些菌株的抗性水平不是大腸桿菌的抗鏈霉素突變發(fā)生于該菌接觸鏈霉素之前，培養(yǎng)基中的鏈霉素只起到選擇作用

【解析】

培養(yǎng)基從用途上分為鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基，這兩種用途的培養(yǎng)基通常都是固體培養(yǎng)基，需要在培養(yǎng)基中加入起凝固作用的瓊脂。鑒別培養(yǎng)基是用于鑒定特定菌種是否存在的培養(yǎng)基，如鑒別大腸桿菌需要在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)，如果出現(xiàn)黑色菌落，則說明存在大腸桿菌菌落；選擇培養(yǎng)基是用于篩選所需類型的培養(yǎng)基，如為了篩選到抗鏈霉素的大腸桿菌突變株，需要在培養(yǎng)基中加入起選擇作用鏈霉素，根據(jù)題干中操作方法，如果能在較高濃度鏈霉素的培養(yǎng)基中形成菌落則為抗鏈霉素的菌株。

（1）題中實驗?zāi)康氖菫榱撕Y選大腸桿菌抗鏈霉素突變株，所以所用的培養(yǎng)基從用途上分，屬于選擇培養(yǎng)基，為了使培養(yǎng)基能夠凝固，通常需要在培養(yǎng)基中加入凝固劑——瓊脂。

（2）涂布操作時，涂布器可沾取少量酒精在火焰上引燃，進(jìn)行灼燒滅菌。在固體培養(yǎng)基上接種后將平板進(jìn)行倒置培養(yǎng)，以防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基感染雜菌。

（3）由于大腸桿菌在加入伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基會形成黑色的菌落，所以圖丙培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為黑色。用無菌接種環(huán)接觸單個菌落朝高藥物濃度方向劃線，其目的是讓接種環(huán)攜帶大腸桿菌到高藥物濃度處，若能正常生長，說明該大腸桿菌抗鏈霉素的能力強(qiáng)，即測試這些菌株的抗性水平。

（4）培養(yǎng)基中的鏈霉素不是誘發(fā)大腸桿菌突變的因素，只是對大腸桿菌是否具有抗性進(jìn)行選擇而已，所以大腸桿菌抗鏈霉素突變不是由鏈霉素引起。