Question

【題目】下圖是獲得人乳鐵蛋白的技術路線。（圖中tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三種限制酶的酶切位點如圖所示）

據圖回答：

（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或 技術獲得人乳鐵蛋白基因。據圖分析，過程①表示____ ．，該過程需要的限制酶是___ _。篩選含有重組載體的大腸桿菌，培養基中應另添加____ 。

（2）圖中過程②最常用的方法是__ __。體外培養受精卵時，需將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養箱中進行培養，C02的主要作用是 。

（3）圖中過程___ _（填序號）表示胚胎移植，在胚胎移植前要對代孕牛進行___ _處理。

（4）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達，可采用 技術。

Answer 1

【答案】

（1）PCR（多聚酶鏈式反應）（1分） 基因表達載體的構建 HindIII和BamH I 氨芐青霉素

（2）顯微注射法 維持培養液的PH

（3）④（1分） 同期發情（1分）

（4）抗原-抗體雜交

【解析】

（1）已知目的基因的全部序列可以采用化學方法人工合成，也可以使用PCR技術進行擴增獲得。圖中過程1是將目的基因和質粒進行連接的基因表達載體的構建，是基因工程的核心。該過程中需要用限制酶對目的基因和運載體進行切割，分析圖可知應使用HindIII和BamH I才能將目的基因完全切下來然后用DNA連接酶進行連接。因為該質粒含有的抗性基因是抗氨芐青霉素的，所以應在含氨芐青霉素的培養基上進行初步篩選。

（2）將目的基因導入到動物受精卵中常使用顯微注射法。在動物細胞培養液中加入二氧化碳的目的是維持培養液的PH。

（3）將早期胚胎轉移到代孕母牛體內需要經過胚胎移植，即圖中的4過程。代孕母牛的生理狀況要與供體母牛相同，所以要對它們進行同期發情處理。

（4）檢測目的基因是否表達成為蛋白質需要抗原-抗體雜交，如果出現雜交帶，說明表達成功。

生物種類	植物	動物	微生物
常用方法	農桿菌轉化法	顯微注射技術	感受態細胞法
受體細胞	體細胞或受精卵	受精卵	原核細胞
轉化過程	將目的基因插入到Ti質粒的TDNA上→農桿菌→導入植物細胞→整合到受體細胞染色體的DNA上→表達	將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物	Ca2＋處理細胞→感受態細胞→重組表達載體DNA分子與感受態細胞混合→感受態細胞吸收DNA分子