Question

【題目】回答下列(一)、(二)小題。

(一)回答泡菜腌制與微生物分離有關的問題

（1）泡菜是利用微生物發酵制成的,為減少泡菜腌制時間,可加入一些陳泡菜汁,這相當于接種已經___________________的發酵菌,發酵產物含有機酸和_________________物質等,還有亞硝酸。若以光電比色法測定泡菜中亞硝酸鹽含量,需將制備的待測樣液與_______________________發生重氮化反應,產物再與N-1-萘基乙二胺偶聯而顯色。

（2）現取5mL上述陳泡菜汁用于測定其中的乳酸菌含量,可采取___________方法進行操作:取0.5mL泡菜汁逐級稀釋至10-5,取10-4、10-5稀釋液各0.1mL,分別接種到固體培養基,置于特定環境培養48h后,菌落計數。若培養結果如下圖所示,則5mL陳泡菜汁中乳酸菌約________________個。

（3）除了上述方法之外,還有________________________和_______________________等方法可用于陳泡菜汁中乳酸菌的計數。

(二)下圖為單克隆抗體制備的基本過程,其中①、②為操作過程。

回答下列問題:

（1）圖中過程①需滅活的仙臺病毒介導或_______________介導或電融合技術。過程②表示_________________。

（2）圖中細胞甲的名稱為__________________。對細胞乙進行抗體檢測的目的是__________________。

（3）體外培養到一定時期的細胞丁會因為_________________和代謝消耗引起營養枯竭,需進行傳代培養。獲取單克隆抗體可作為_________________,研究相應抗原蛋白的結構、細胞學分布及其功能。

（4）上述全過程需多次細胞克隆培養,下列不屬于提高細胞克隆形成率措施的是_____________________。

A.添加飼養層細胞 B.添加胎牛血清 C.添加蔗糖 D.使用CO2培養箱

Answer 1

【答案】擴增/擴大培養 醇類 對氨基苯磺酸 （稀釋）涂布分離/涂布 7107 血球/血細胞（計數板）計數法 比濁（計）法 聚乙二醇/PEG 抗體檢測（與克隆培養） 骨髓瘤細胞 獲取能夠產生相應抗體雜交瘤細胞 細胞密度過大/數量過多 探針 C

【解析】

（一）制作泡菜時所使用的微生物是乳酸菌，代謝類型是異養厭氧型。泡菜中的亞硝酸鹽的含量可以用比色法進行測定，原理是在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽和對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色的染料，將顯色反應后的樣品與已知濃度標準顯色液目測比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽含量。

（二）單克隆抗體的制備：1、細胞來源：B淋巴細胞：能產生特異性抗體，在體外不能無限繁殖；骨髓瘤細胞：不產生專一性抗體，體外能無限繁殖。
2、雜交瘤細胞的特點：既能大量增殖，又能產生特異性抗體。
3、兩次次篩選：①篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交細胞以及自身融合的細胞）；②篩選出能夠產生特異性抗體的細胞群。
4、兩次抗體檢測：專一抗體檢驗陽性。
5、提取單克隆抗體：從培養液或小鼠腹水中提取。
6、單克隆抗體的優點：特異性強、靈敏度高，并可能大量制備。

（一）（1）為減少泡菜腌制時間，可加入一些陳泡菜汁，由于陳泡菜汁中含有大量乳酸菌，所以這相當于接種已經擴大培養了的發酵菌。發酵產物含有機酸和醇類物質等，還有亞硝酸。測定泡菜中亞硝酸鹽含量，需將制備的待測樣液與對氨基苯磺酸發生重氮化反應，產物再與N-1-萘基乙二胺偶聯而顯玫瑰紅色。

（2）計算菌體數量，需要使用稀釋涂布平板法接種，所以若測定泡菜汁中的乳酸菌含量，可采取（稀釋）涂布分離方法進行操作。取0.5mL泡菜汁逐級稀釋至10-5，取10-4、10-5稀釋液各0.1mL，分別接種到固體培養基，置于特定環境培養48h后，菌落計數。經統計當稀釋至10-5時，菌落平均數是14個，則5ml陳泡菜汁中乳酸菌約14÷0.1×5×105=7x107個。

（3）除了上述方法之外，還有血球/血細胞(計數板)計數法、比濁(計)法、光電比色法、用比濁計測、測渾濁度等方法可用于陳泡菜汁中乳酸菌的計數。

（二）（1）圖中過程①需滅活的仙臺病毒介導或聚乙二醇介導或電融合技術。過程②表示獲取能夠產生相應抗體的雜交瘤細胞。
（2）骨髓瘤細胞可大量增殖，經免疫的B細胞可分泌抗體，將二者融合可篩選得到既能無限增殖又能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，所以圖中細胞甲的名稱為骨髓瘤細胞。對細胞乙進行抗體檢測的目的是獲取能夠產生相應抗體的雜交瘤細胞。
（3）體外培養到一定時期的細胞丁會因為細胞密度過大和代謝消耗多而引起營養枯竭，此時需轉移到其它培養瓶中進行傳代培養。獲取單克隆抗體可作為探針，研究相應抗原蛋白的結構、細胞學分布及其功能。
（4）細胞培養需要的條件是添加飼養層細胞，添加胎牛血清和使用CO2培養箱，綜上所述，ABD不符合題意，C符合題意。故選C。