Question

【題目】轉基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質粒上有Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ等四種限制酶切割位點。請回答：

（1）構建含抗病基因的表達載體A時，應選用限制酶____________ ，對__________進行切割。而后用___________酶處理。獲得重組質粒A。

（2）將重組質粒A與農桿菌混合后，應首先用________處理使其成為________細胞。

（3）培養基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養基篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，應使基因表達載體A中含有_________，作為標記基因。

（4）香蕉組織細胞具有________，因此，可以利用____________技術將導入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養過程中香蕉組織細胞的________和___________，B表示__________。

（5）若要鑒定抗病基因是否翻譯成蛋白質，可采用_______________檢測。

Answer 1

【答案】 PstI、EcoRI 質粒和含抗病基因的DNA DNA連接酶 鈣離子 感受態 抗卡那霉素基因 全能性 植物組織培養 脫分化 再分化 愈傷組織 抗原—抗體雜交技術

【解析】【試題分析】

本題結合轉基因抗病香蕉的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養技術的相關知識，要求考生識記基因工程的具體操作步驟；識記植物組織培養的原理和過程，能準確判斷圖中各過程的名稱，再結合所學的知識準確答題。分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點，所以要獲得重組質粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割。①表示脫分化過程、②表示再分化過程、B表示愈傷組織。

（1）含抗病基因的DNA上含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，但限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，用SmaⅠ位點進行切割會破壞抗病基因的結構，所以要獲得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ對圖中對應的位點進行切割。要獲得含抗病基因的重組質粒，應選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割質粒和含目的基因的外源DNA分子。而后用DNA連接酶處理，獲得重組質粒A。

（2）將重組質粒A與農桿菌混合后，應首先用鈣離子處理使其成為感受態細胞。

（3）培養基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養基篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，應使基因表達載體A中含有抗卡那霉素基因，作為標記基因。

（4）香蕉組織細胞具有全能性，因此，可以利用植物組織培養技術將導入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中①、②表示脫分化過程、②表示再分化過程，B表示愈傷組織。

（5）若要鑒定抗病基因是否翻譯成蛋白質，可采用抗原—抗體雜交技術檢測。